De Sabouraud agar, även känd som Sabouraud dextrosagar, det är ett fast odlingsmedium, speciellt anrikat för isolering och utveckling av svampar, såsom jäst, mögel och dermatofyter..
Därför kan detta medium inte saknas i ett mikrobiologilaboratorium för att undersöka förekomsten av patogena eller opportunistiska svampar, varken från kliniska eller icke-kliniska prover. På samma sätt är den också idealisk för tillväxt av filamentösa bakterier som Streptomyces och Nocardias. Dess användning är mycket bred, eftersom den kan användas i human, djur, växt och industriell mykologi.
Detta medium skapades 1896 av den framstående hudläkaren Raimond Sabouraud, som blev en världsberömd specialist i hårbotten, främst orsakad av dermatofyter..
Skapandet var så viktigt att det har använts sedan dess och förblir idag, men med vissa modifieringar.
Även om det är speciellt för svampar, kan bakterier växa i detta medium, därför krävs det för prover med blandad flora att inkludera antibiotika i deras beredning och därmed hämma tillväxten av den bakterieflora som kan vara närvarande..
Valet av antibiotikum måste göras noggrant och med hänsyn till vilken typ av svamp som ska återvinnas, eftersom vissa är hämmade i närvaro av vissa ämnen.
Artikelindex
Sabouraud dextrosagar är ett medium som i sin ursprungliga formulering är svagt selektivt på grund av dess sura pH på 5,6 ± 0,2, men bakterier kan fortfarande utvecklas, främst i långvariga inkubationer.
Mediet innehåller kaseinpepton och bukspottkörtelns smältning av djurvävnad som ger källan till kol och kväve för tillväxt av mikroorganismer..
Den innehåller också en hög koncentration av glukos, som fungerar som en energikälla, vilket främjar tillväxten av svampar över bakterier. Allt blandat med agar-agar, en komponent som ger den rätt konsistens..
Å andra sidan kan Sabouraud dextrosagar vara selektiv om antibiotika tillsätts..
Med antibiotika är det särskilt användbart i prover av sår, öppna sår eller något prov där man misstänker stor bakteriekontaminering.
-Sabouraud-agar med kloramfenikol: perfekt för utvinning av jäst och trådformiga svampar.
-Sabouraud-agar med gentamicin och kloramfenikol: nästan alla trådiga svampar och jäst växer på detta medium och hämmar ett stort antal bakterier, inklusive Enterobacteriaceae, Pseudomonas och Staphylococcus.
-Sabouraud-agar med cykloheximid: det är särskilt användbart för prover från huden eller luftvägarna, så länge misstanken är dimorfa svampar.
Cykloheximid bör användas med försiktighet; Även om det används för att hämma tillväxten av icke-patogena eller miljömässiga svampar och jästar som kan förekomma som föroreningar i ett prov, hämmar det också tillväxten av vissa svampar såsom Cryptococcus neoformans, Aspergillus fumigatus, Allescheria boydii, Penicillium sp och andra opportunistiska svampar.
-Sabouraud-agar med kloramfenikol plus cykloheximid: används främst för att isolera dermatofyter och dimorfa svampar. Det har nackdelen att det hämmar vissa arter av opportunistiska svampar såsom Candida inga albicans, Aspergillus, Zygomycetes eller C. neoformans.
-Sabouraud-agar med kloramfenikol, streptomycin, penicillin G och cykloheximid: det är idealiskt för prover extremt kontaminerade med bakterier och saprofytiska svampar, men det har nackdelen att det hämmar tillväxten av Actinomyces och Nocardias, förutom de ovan nämnda opportunistiska svamparna.
Om du har ingredienserna separat kan de beredas enligt följande:
Väga:
- 40 gr dextros
- 10 g pepton
- 15 gr agar-agar
- Mät 1000 ml destillerat vatten
Alla ingredienser blandas, pH justeras till 5,6. De lösta ämnena löses genom kokning, 20 ml av mediet fördelas i rör på 25 x 150 mm, utan kant och företrädesvis med en bomullslock..
Andra rörstorlekar kan också användas, beroende på tillgänglighet.
De autoklaveras i 10 minuter vid en atmosfär av tryck (121 ° C). Autoklaveringstiden bör inte överskridas. När du lämnar autoklaven lutas rören med hjälp av ett stöd tills de stelnar i en flöjtstopp..
Ett annat sätt är att lösa upp ingredienserna genom att värma tills det kokar. I samma kolv, autoklav i 10 minuter och fördela sedan 20 ml i petriskålar..
Om du har ett Sabouraud dextrosagarmedium som redan innehåller alla ingredienser, fortsätt att väga den mängd som anges av det kommersiella företaget för en liter vatten. Resten av stegen är desamma som de som beskrivs ovan.
Väga:
- 20 gr dextros
- 10 g pepton
- 17 gr agar-agar
- Mät 1000 ml destillerat vatten
Alla ingredienser blandas, pH justeras till 6,9. Fortsätt på samma sätt som i föregående fall.
Det finns kommersiella hus som erbjuder mediet med alla ingredienser. I detta fall väger du och förbereder enligt beskrivningen på insatsen..
- Väg 500 mg kloramfenikolbas
- Mät 100 ml 95% etanol
- Blanda
Sabouraud dextros-agarmedium (Emmons) framställs såsom beskrivits tidigare och tillsätt dessutom för varje liter medium 10 ml kloramfenikol stamlösning innan autoklavering..
- Väg 5 g cykloheximid
- Mät 100 ml aceton
- Blanda
Sabouraud-dextrosagarmedium (Emmons) framställs som tidigare beskrivits och tillsätt dessutom för varje liter medium 10 ml cykloheximid-stamlösning innan autoklavering..
Sabouraud dextrosagarmedium (Emmons) framställs som beskrivits och tillsätt dessutom för varje liter medium 10 ml kloramfenikol stamlösning och 10 ml cykloheximid stamlösning innan autoklavering..
20 000 till 60 000 enheter penicillin per liter medium.
30 mg streptomycin per liter medium.
Båda måste införlivas efter att mediet har autoklaverats, svalt kylts (50-55 ° C).
0,04 g neomycin per liter medium.
0,04 g gentamicin per liter medium.
För säkerhet är det att föredra att så Sabouraud dextrosagar i kilformade rör (snedställda i flöjtnäbb) snarare än i petriskålar för att undvika spridning och inandning av sporer.
Det är viktigt att Sabouraud-agarrören är täckta med bomull och inte med ett skruvlock, eftersom semi-anaeroba förhållanden har visat sig hämma sporbildning i vissa stammar, till exempel Coccidioides immitis. De flesta svampar är också aeroba..
Stäng inte hermetiskt om du använder skruvlock.
Det beredda mediet bör genomgå kvalitetskontroll för att verifiera att det fungerar korrekt. För detta sås vissa kontrollstammar.
För Sabouraud dextrosagar med kloramfenikol, ATCC-stammar av Candida albicans, som måste ha utmärkt tillväxt. En annan platta ympas med stammar Escherichia coli, måste hämmas helt.
En oinokulerad platta inkuberas också där inga mikroorganismer ska växa..
För Sabouraud dextrosagar med kloramfenikol och cykloheximid, stammar av Trichophyton mentagrophytes, bör utvecklas väl. En annan platta ympas med en stam av Aspergillus flavus, där det måste finnas liten eller ingen tillväxt. Dessutom inkuberas en oinokulerad platta för att visa sin sterilitet..
För Sabouraud dextrosagar med cykloheximid, stammar av Candida albicans, Trichophyton rubrum eller Microsporum canis, som måste visa god tillväxt.
Likaså en stam av Aspergillus flavus, visar liten eller ingen tillväxt. Slutligen inkubera en oinokulerad platta för sterilitetskontroll..
Klassisk Sabouraud dextrosagar innehåller 4 gram dextros och är utmärkt som ett primärt isoleringsmedium, eftersom det visar den karakteristiska morfologin för varje svamp..
Det är också utmärkt för att demonstrera pigmentproduktion. Det är dock inte det mest lämpliga sättet att observera sporulering..
Det rekommenderas inte heller för odling Blastomyces dermatitidis, som inhiberas av den höga koncentrationen av glukos som är närvarande.
Å andra sidan måste vissa överväganden beaktas för odling.
Vissa svampar växer bäst vid rumstemperatur, som mögel, andra växer framgångsrikt vid 37 ° C, som vissa jästar, och andra kan växa vid båda temperaturerna (dimorfa svampar).
Av denna anledning är det ibland nödvändigt att använda flera Sabouraud-agarplattor för samma prov, eftersom duplicering av sådd ofta utförs för att inkubera en platta vid rumstemperatur och en annan vid 37 ° C..
Till exempel, Sporothrix schenckii den sås i två tallrikar; en inkuberas vid rumstemperatur för att erhålla mögelfasen och den andra inkuberas vid 37 ° C för att erhålla jästfasen, men i den senare är det nödvändigt att tillsätta 5% blod till mediet.
I andra fall, såsom mycetomprover, sås två Sabouraud-agarplattor, en med kloramfenikol och den andra med cykloheximid. Den första möjliggör tillväxt av orsakande medel av mycetom av svampursprung (Eumycetoma) och de andra orsakande medlen för mycetom av bakteriellt ursprung, såsom aktinomycetom..
Sabouraud dextrosagar modifierad av Emmons innehåller 2 gram dextros och används inte bara för isolering utan också för sporulering och konservering av svampar.
I detta medium, om stammar av Blastomyces dermatitidis.
För att bevara svampkulturer kan de förvaras i kylskåp (2-8 ° C). Bevarandetiden kan variera mellan 2 och 8 veckor. Efter denna tid måste de subkultureras för att upprepa processen..
Vissa svampar håller sig bäst vid rumstemperatur, t.ex. Epidermophyton foccosum, Trichophyton schoenleinnii, T. violaceum Y Microsporum audounii.
Underhållet av stammen kan förlängas för att undvika pleomorfism om dextros elimineras fullständigt från agaren och om mängden agar i mediet reduceras för att undvika torrhet.
För identifiering av vissa trådformiga svampar är det nödvändigt att utföra mikrokulturer med Sabouraud-agar eller andra speciella medel för att observera strukturerna för sexuell och asexuell reproduktion..
Det används främst för diagnos av svampsjukdomar, särskilt de som påverkar huden och dess fästen (hår och naglar).
Proverna kan vara utsöndringar, utsöndringar, hud, hår, naglar, sputum, CSF eller urin. Vanligen isolerade patogener är dermatofyter, svampar som orsakar subkutana och systemiska mykoser..
Djur påverkas ofta av svampinfektioner, därför är Sabouraud-agar lika användbar i djurmykologi som hos människor..
Till exempel kan dermatofyter ofta påverka djur. Så är fallet med Microsporum canis var distortum, Det smittar ofta hundar, katter, hästar, grisar och apor. likaså, Microsporum gips smittar hundar, katter och boskap.
Fåglar som kycklingar, tuppar och kycklingar påverkas av Microsporum gallinae.
Andra svampar, såsom Zymonema farciminosum, De är också orsaken till sjukdom hos djur, främst hästar, mulor och åsnor, vilket orsakar betydande inflammation i lymfkärlen..
Sporothrix schenkii och Histoplasma capsulatum påverkar husdjur och människor.
Många patogena eller opportunistiska svampar kan koncentreras vid en viss tidpunkt i en viss miljö, särskilt i operationsrum och intensivvårdsavdelningar på kliniker och sjukhus. Därför är det nödvändigt att utföra en kontroll av dem.
Andra utsatta utrymmen är bibliotek och gamla byggnader som kan påverkas av koncentrationen av miljösvampar.
I miljöstudier används Sabouraud dextrosagar för isolering av svampar..
Sabouraud dextrosagar kan inte vara frånvarande för studier av kontaminerande svampar vid produktion av kosmetika, mat, drycker, läder, textilier, bland andra..
Växter lider också av sjukdomar orsakade av svampar som påverkar olika delar av växten, vilket till och med kan avsluta skörden, vilket orsakar stora förluster i jordbruket..
Ingen har kommenterat den här artikeln än.