De TCBS agar är ett mycket selektivt och differentierat fast odlingsmedium, som används för isolering och odling av bakterier av släktet Vibrio, särskilt Vibrio cholerae, V. vulnificus Y V. parahaemolyticus som de viktigaste patogenerna i detta släkte.
Förkortningen TCBS står för tiosulfatcitratgallsackaros. Denna agar är också känd som ett selektivt medium för Vibrios. Den ursprungliga formeln skapades av Nakanishi och modifierades senare av Kobayashi.
Den består av jästextrakt, köttpepton, triptein, natriumcitrat, natriumtiosulfat, oxgalla, sackaros, natriumklorid, järncitrat, bromotymolblått, tymolblått och agar..
Denna komposition möjliggör en adekvat utveckling av Vibrio-arter från vatten-, mat- och avföringsprover; bortsett från Vibrio hollisae, som inte växer i denna miljö. Dessutom kan TCBS-medium hämma tillväxten av andra medföljande bakterier, särskilt koliforma..
På grund av de allvarliga gastrointestinala och extra tarmproblemen som vissa arter av Vibrio-släktet producerar är dess diagnos mycket viktig. Människor smittas främst av att konsumera rå eller underkokt mat från havet eller förorenat vatten, men också genom sårinfektion.
På grund av detta bör kliniska laboratorier inkludera TCBS-agar i avföringskulturstudien av flytande avföringsprover, särskilt med utseendet på risvatten. Speciellt om patienten rapporterar att han har varit i kontakt med havsvatten eller har konsumerat skaldjur eller fisk.
Artikelindex
Jästextrakt, köttpeptoner och triptein är näringskällan för detta medium. TCBS-agar är emellertid ett ogästvänligt medium för de flesta bakterier..
Dess höga selektivitet ges genom tillsats av natriumcitrat och oxagalla; båda är hämmande medel som också ger mediet ett alkaliskt pH, vilket begränsar tillväxten av medföljande flora och gynnar tillväxten av V. kolera, bland andra arter. I synnerhet Vibrio cholerae är mycket känslig för surhet.
För sin del balanserar natriumklorid mediet osmotiskt. Eftersom dess koncentration är hög, fungerar den också som ett hämmande medel, vilket gynnar tillväxten av halofila bakterier..
Sackaros är det fermenterbara sockret som tillsammans med de blå bromotymol- och tymolblå pH-indikatorerna ger mediet dess differentiella karaktär. Av detta skäl är det med detta medium möjligt att skilja sackarosjäsande stammar från icke-jäsning..
Kolonier av jäsande stammar av sackaros utvecklas gult i färg och förvandlar mediet från grönt till gult genom syraproduktion. Icke-jäsare blir genomskinliga och mediet förblir originalfärgen (grön).
På samma sätt innehåller detta medium natriumtiosulfat som källa till svavel och järncitrat som ett utvecklingsmedel. Båda visar bakterier som kan producera vätesulfid (färglös gas). HtvåS bildas av tiosulfat och därefter bildas, vid reaktion med järncitrat, en synlig svart fällning..
Slutligen är agaren den som ger mediet en solid konsistens.
Väg 89 g av det uttorkade mediet och lös det i en liter destillerat vatten. Hjälp till upplösning genom uppvärmning och ofta omrörning Blandningen kan kokas i upp till 2 minuter..
Detta medium autoklaveras inte. Efter upplösning serveras den direkt på sterila tallrikar. När de stelnar ordnas de inverterat i plack och förvaras i kylskåp (2-8 ° C) tills de används..
Mediet efter beredning måste förbli vid pH 8,6 ± 0,2.
Färgen på det uttorkade mediet är ljusbeige eller grön-beige, och färgen på mediet är skogsgrön eller blågrön.
Det är viktigt att låta plattorna värmas upp innan proverna sås ut..
Det vanligaste exemplet för Vibrios-isolering är diarréavföring..
Pallprover om de inte kan sås omedelbart på det selektiva mediet, måste de transporteras på Cary Blair-mediet..
För att öka odlingens känslighet kan avföringen passera genom peptonvatten vid pH 8,4 som ett anrikningsmedium under högst 8 timmar, därifrån odlas det till TCBS-mediet..
Det bör också beaktas att vissa stammar av Vibrios kan orsaka septikemi hos immunsupprimerade patienter, därför kan de isoleras från blodkulturer. På samma sätt kan prover av vatten och mat från havet analyseras när det finns epidemiska utbrott av kolerasjukdom..
Inokulatet för provet som studeras måste vara framträdande, såningen utförs med striationsmetoden genom utmattning. Plattorna inkuberades vid 37 ° C under 24 timmar i aerobios.
De förmodade kolonierna i Vibrio cholerae de är medelstora, släta, ogenomskinliga, tunna kanter och gula i färg på grund av jäsande sackaros.
På samma sätt är arten av V. alginolyticus, V. fluvialis, V. hareyi, V. cincinnatiensis, V. furnissii, V. metschnikovii och lite V. vulnificus. Andra kliniskt viktiga Vibrios-arter som V. parahaemolyticus jäsa inte sackaros och utvecklas som olivgröna kolonier.
Å andra sidan måste man komma ihåg att vissa stammar av Aeromonas och Plesiomonas som är oxidas (+) kan växa i detta medium och utveckla gula kolonier som kan förvirra läkaren. Medan vissa stammar av Pseudomonas också oxidas (+) växer som gröna kolonier precis som V. parahaemolyticus.
Oxidastestet som är positivt för Vibrio-släktet ska aldrig utföras från kolonier erhållna från TCBS-agar, eftersom det erhållna resultatet blir falskt negativt. Föreningar i mitten stör starkt detta test. Därför måste det utföras från subkulturer på blodagar..
För att bevisa att mediet är i gott skick är det lämpligt att så kända eller certifierade kontrollstammar och observera om tillväxten uppfyller de förväntade egenskaperna..
För detta kan du använda stammar av:
-Vibrio cholerae - tillfredsställande tillväxt (gula kolonier, genomskinlig gräns).
-Vibrio parahaemolyticus - tillfredsställande tillväxt (koloni med grönt centrum och genomskinlig kant).
-Vibrio alginolyticus ATCC 17749 - tillfredsställande tillväxt (gula kolonier med samma färger runt kolonin).
-Enterococcus faecalis ATCC 29212 - total eller partiell hämning (små gula eller genomskinliga kolonier).
-Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853- partiell eller total hämning (blå kolonier).
-Escherichia coli ATCC 25922 - Hämmas helt.
-Proteus mirabilis ATCC 43071 - Hämning helt eller delvis. (Små kolonier grönt centrum genomskinlig kant).
Inkubation av oinokulerat medium bör vara oförändrat.
Ingen har kommenterat den här artikeln än.