Tetrathionat buljongfundament, beredning och användningsområden

1692
Philip Kelley

De tetrationjon buljong eller TT-buljong är ett selektivt flytande odlingsmedium för anrikning och återvinning av stammar av släktet Salmonella. Det skapades av Müeller och senare modifierat av Kauffmann, varför det finns de som kallar det Müeller-Kauffmann buljong.

Det ursprungliga mediet innehöll proteospeptoner, kalciumkarbonat och natriumtiosulfat. Kauffmann tillsatte gallsalter till den och skapade en annan modalitet med ljusgrönt. Dessa ämnen hämmar tillväxten av koliforma ämnen och lämnar mediet fritt för utveckling av patogena bakterier, i detta fall Salmonella.

Tillsätt jodlösningen till tetrationjonbuljongen. Källa: Manuel Almagro Rivas [CC BY-SA 4.0 (https://creativecommons.org/licenses/by-sa/4.0)]

Modifieringen var mycket framgångsrik eftersom den signifikant ökade mediets känslighet. Av denna anledning är det för närvarande användbart för sökandet efter Salmonellas i alla typer av prov, men särskilt för fasta eller flytande avföring och mat..

Dess beredning består av två faser; det kommersiella mediet är en bas för att bereda tetrationjonbuljongen, och därefter så att tetrationatet kan bildas tillsätts en joderad jodlösning för att komplettera mediet.

American Public Health Association (APHA) rekommenderar användning av tetrationatbuljong kompletterat med ljusgrönt för berikning av prover för Salmonella, eftersom det är mer selektivt än tetrationatbuljong och selenitbuljong..

I allmänhet är tetrationjonbuljong ideal när närvaron av bakterier av släktet Salmonella misstänks i små mängder eller när de missbrukas genom exponering för hämmande ämnen eller genom industriella processer som minimerar deras livskraft..

Artikelindex

  • 1 Motivering
  • 2 Förberedelse
    • 2.1 -Tetrationat buljong
    • 2.2 -Variant tetrationjon buljong med ljusgrön
  • 3 Använd
  • 4 Kvalitetskontroll
  • 5 rekommendationer
  • 6 Referenser

Grund

De närvarande peptonerna motsvarar pankreasmältning av kasein och peptisk smältning av djurvävnad. Dessa ger källan till kol, kväve och allmänna näringsämnen för bakterietillväxt..

För sin del reagerar natriumtiosulfat med den joderade lösningen för att bilda tetraktion. Detta hämmar tillväxten av koliforma ämnen och gynnar utvecklingen av bakterier som innehåller enzymet tetrationatreduktas, bland dem är släktet Salmonella, men också Proteus.

Gallsalter fungerar också som en hämmande substans för de flesta gram-positiva och vissa gram-negativa bakterier (koliforma)..

Kalciumkarbonat absorberar de giftiga ämnen som genereras genom sönderdelningen av tetraktion, som bildar svavelsyra. I denna mening neutraliserar kalciumkarbonat surheten, vilket håller mediumets pH stabilt..

När det gäller den ljusgröna modaliteten ökar detta ämne den selektiva kraften hos tetrationjonbuljong genom att hämma andra mikroorganismer än Salmonella-släktet..

Förberedelse

-Tetrathionat buljong

Jodlösning

Väga:

  • 6 gram jod.
  • 5 g kaliumjodid.

Kaliumjodiden löses i ungefär 5 ml sterilt destillerat vatten, därefter tillsättes joden lite efter lite medan blandningen upphettas. Efter att den är helt upplöst, fyll på sterilt destillerat vatten till märket tills det når en slutlig volym på 20 ml..

Basmedium för tetrakionatbuljong

Väg 46 gram av det uttorkade mediet och suspendera i 1 liter sterilt destillerat vatten. Blanda och värm tills det är helt upplöst, det kan bara koka i några minuter. Autoklaver inte. Basen på mediet får svalna till ungefär 45 ° C och vid den tiden tillsätts 20 ml av den joderade lösningen..

Efter tillsats av jodlösningen till mediet ska den användas omedelbart. Gör så här om du inte vill använda hela blandningen:

10 ml av basmediet fördelas i rör, och endast de som skall inokuleras med prover tillsätts 0,2 ml av den joderade lösningen..

De som inte ska användas kan fortfarande förvaras i kylskåpet, men eftersom mediet inte steriliseras är idealet att förbereda den exakta mängden som behövs..

Färgen på mediet före tillsats av jodjodlösningen är mjölkvit med en vit fällning och efter tillsats är den brun med en tät fällning. Den observerade fällningen är normal och motsvarar kalciumkarbonat som inte löses upp. Mediets slutliga pH är 8,4 ± 0,2.

-Lysande grön tetrathionat buljong variant

För att bereda den ljusgröna tetrationjonbuljongen utförs alla stegen som beskrivs ovan, men dessutom tillsätts 10 ml av den ljusgröna lösningen framställd med 0,1% till blandningen..

Lysande grönt

Denna lösning framställs enligt följande:

Väg ut 0,1 g ljusgrönt och suspendera i 100 ml destillerat vatten. Värm till koka för att uppnå fullständig upplösning. Förvara i bärnstensfärgad flaska.

Använda sig av

För avföringsprover (avföringskultur) är protokollet enligt följande:

Inokulera 1 g fast avföring eller 1 ml flytande avföring i ett rör med 10 ml färdig att använda tetrationjonbuljong. Skaka kraftigt och inkubera aerobt vid 43 ° C i 6-24 timmar.

Ta sedan en alikvot på 10 till 20 pl av buljongen och subkulturen i ett selektivt medium för Salmonella, såsom SS-agar, XLD-agar, ljusgrön agar, Hektoen enterisk agar, bland andra..

Parallellt bör selektiva medier för Salmonella ympas med det direkta provet (avföring) utan anrikning. För prover av rektal svabb, släpp ut det uppsamlade materialet i röret och fortsätt enligt beskrivningen ovan..

För matprover, väg 10 g fast mat eller 10 ml flytande mat och ympa en flaska med 100 ml färdig att använda tetrationjonbuljong. Fortsätt på samma sätt som beskrivits ovan men inkubera vid 37 ° C.

Som framgår kommer förhållandet mellan provet och buljongen alltid att vara 1:10.

QA

Kända kontrollstammar kan användas för att testa odlingsmediet. De mest använda är ATCC-certifierade stammar.

Stammarna att använda är Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella abony DSM 4224, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Escherichia coli ATCC 25922, Enterococcus faecalis ATCC 19433 och Staphylococcus aureus ATCC 25923.

Utmärkt utveckling förväntas för Salmonella-stammar medan Escherichia coli kan ha svag eller regelbunden utveckling, och grampositiva stammar (Enterococcus och Staphylococcus) är delvis eller helt hämmade.

rekommendationer

-Eftersom detta medium inte hämmar tillväxten av Proteus, använder vissa laboratorier att placera 40 mg / L novobiocin för att undvika utvecklingen av denna mikrobiella stam. Antibiotikumet måste tillsättas före jodlösningen..

-Efter att ha berett mediet inklusive jodjodlösningen bör det inte ta mer än 2 timmar att ympa..

-Vid fördelning av mediet i rören måste blandningen homogeniseras kontinuerligt för att återsuspendera den bildade fällningen..

-I mindre kontaminerade prover inkuberas tetrationjonbuljongen vid 35-37 ° C och i starkt kontaminerade prover rekommenderas inkubation vid 43 ° C..

Referenser

  1. Conda Pronadisa-laboratoriet. 2010. Tetrathionat buljongbas enligt Müeller-Kauffmann. Tillgänglig i:
  2. BD Laboratories. 2003. Tetrathionat buljongbas. Tillgänglig i:
  3. Britannia Laboratories. 2015. Tetranatbasbuljong. Tillgänglig i:
  4. BBL Media. 2005. Förberedelser i rör för odling av Salmonella-arten.
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnos. 12 utgåva Redaktionellt Panamericana S.A. Argentina.
  6. Flores-Abuxapqui J, Puc-Franco M, Heredia-Navarrete M, Vivas-Rosel M, Franco-Monsreal J. Jämförelse mellan natriumselenit och natriumtetrakionat odlingsmedia, båda inkuberade vid 37 ° C och 42 ° C för isolering av Salmonella spp av avföring från bärare. Rev Biomed 2003; 14 (4): 215-220

Ingen har kommenterat den här artikeln än.