De agar M.R.S. är ett selektivt fast odlingsmedium som används för isolering och räkning av mjölksyrabakterier, särskilt av släktet Lactobacillus. Denna agar skapades 1960 av Man, Rogosa och Sharpe, med samma namn, men på grund av dess komplexitet används förkortningen M.R.S ofta..
Den består av proteospepton, köttextrakt, jästextrakt, glukos, sorbitanmonoleat, dikaliumfosfat, natriumacetat, ammoniumcitrat, magnesiumsulfat, mangansulfat och agar..
Denna komposition möjliggör korrekt utveckling av mjölksyrabakterier från kliniska prover, såsom avföring, vaginal urladdning, orala prover och bröstmjölk, samt mejeriprodukter och köttfoder..
Det används inte rutinmässigt i kliniska laboratorier, eftersom mjölksyrabakterier sällan är involverade i sjukdomsprocesser. Inom området för livsmedelsmikrobiologi är användningen av M.R.S-agar dock vanligare..
Å andra sidan används detta medium av vissa forskningscenter vars mål är att studera mjölksyrabakterier..
Artikelindex
Man, Rogosa och Sharpe agar har en ganska komplex komposition. Genom att bryta ner funktionen hos var och en av dess komponenter kan dess förklaring förklaras.
Proteinpepton, köttextrakt, jästextrakt och glukos är näringsämnen som ger källan till kol, kväve, vitaminer och mineraler som är nödvändiga för bakterietillväxt. Dessutom är glukos den universella energikälla som används i de flesta odlingsmedier..
Å andra sidan, för att främja tillväxten av mjölksyrabakterier, är närvaron av kofaktorer (katjoner) nödvändiga i metabolismen av Lactobacillus och relaterade bakterier nödvändig; dessa föreningar är salterna av natrium, magnesium och mangan.
På samma sätt är sorbitanmonoleat eller polysorbat 80 en viktig källa till fettsyror eftersom de absorberas som näringsämnen..
Dessutom verkar sorbitanmonoleat och ammoniumcitrat genom att hämma utvecklingen av medföljande flora, särskilt gramnegativa bakterier, vilket ger den selektiva karaktären hos denna agar..
Slutligen är agar-agaren den som ger mediet en solid konsistens.
Det finns andra varianter av Man Rogosa Sharpe-agar; en av dem kompletteras med cystein (M.R.S.c), mycket användbar för isolering av bifidobakterier, bland andra mikroorganismer. Å andra sidan finns MRS-mediet kompletterat med neomycin, paromomycin, nalidixinsyra och litiumklorid, särskilt för selektiv räkning av bifidobakterier i mejeriprodukter..
Väg ut 68,25 gram av det uttorkade mediet och lös det i en liter destillerat vatten. Låt stå i 5 minuter. För att lösas helt, vänd dig till en värmekälla, omrör ofta och koka i 1 till 2 minuter. Sterilisera i autoklav vid 121 ° C i 15 minuter.
När du lämnar autoklaven, låt stå i några minuter och fördela medan den fortfarande är varm i sterila petriskålar..
Låt plattorna stelna och vänd upp plattorna, beställ dem i tallrikshyllor och kyl dem till användning. Låt plattorna komma till rumstemperatur före användning.
Mediets pH bör vara 6,4 ± 0,2. Vissa kommersiella hus rekommenderar pH mellan 5,5 och 5,9.
Det uttorkade mediet är beige och berett är mörkt bärnstensfärgat.
Både det uttorkade mediet och de beredda plattorna bör förvaras vid 2 till 8 ° C..
M.R.S. De kan sås på ytan (utmattning eller med Drigalski-spatel). Det kan också sås efter djupet. Plattorna ska inkuberas vid 37 ° C i mikroaerofilicitet (4% Otvå och 5-10% COtvå) i 24 till 72 timmar.
Såmetoden väljs utifrån det syfte som eftersträvas (isolering eller räkning).
Förmodade Lactobacillus-kolonier blir vitaktiga i färg och har ett slemhinnigt eller krämigt utseende på denna agar. Senare måste de identifieras.
För detta används ytsådning. Proverna som ska sås kräver en tidigare procedur.
När det gäller bröstmjölkprover rekommenderas att centrifugera 1 ml av provet vid 14 000 rpm i 10 minuter för att ta bort fettlagret. 900 | il kastas och i de återstående 100 | il suspenderas pelleten och hälls på ytan av M.R.S. Den ska sedan fördelas jämnt med en Drigalski-spatel..
När det gäller avföringsprover vägs ett (1) gram avföring och homogeniseras i 9 ml 0,1% sterilt peptonvatten, vilket motsvarar en utspädning 1/10. Därefter görs serieutspädningar tills en slutlig utspädning på 10-4.
Slutligen tas 100 pl av de 10 spädningarna-två, 10-3 och 10-4 och varje utspädning såddes på MRS-agar och fördelades jämnt med en Drigalski-spatel.
I så fall görs såningen med djup.
För bröstmjölkprover tas 1 ml och placeras i ett sterilt koniskt plaströr. MRS-agar tillsättes vid en ungefärlig temperatur av 40 ° C till en slutlig volym av 25 ml, vilket ger en homogen blandning. Därefter hälls den i sterila petriskålar på ett enhetligt sätt och får vila tills polymerisation..
För avföringsprover görs utspädningar, såsom tidigare beskrivits. Ta 1 ml av varje utspädning och placera den i sterila koniska plaströr. Smält MRS-agar tillsätts till en volym av 25 ml.
Blandningen från varje utspädning hälls jämnt i sterila petriskålar. Slutligen får den vila tills den är polymeriserad.
Varje dag får studien av mjölksyrabakterier mer intresse; Forskare försöker särskilt lära sig om nya stammar och deras potential som startjäser för standardisering vid tillverkning av mejeriprodukter, bland andra användningsområden..
I denna mening, Alvarado et al. (2007) använde M.R.S. att genomföra en studie där de isolerade, identifierade och karakteriserade mjölksyrabakterier som var närvarande i en hantverkare i Andesrökt venezuelansk ost.
I osten hittade de närvaron av bakterier av släkten Lactococcus och Lactobacillus och drog slutsatsen att blandningarna av isolerade stammar är lämpliga som startstammar vid tillverkning av ost från pastöriserad mjölk..
Å andra sidan Sánchez et al. (2017) använde M.R.S. att undersöka närvaron av mjölksyrabakterier i grisarnas matsmältningskanal, för att använda dem som nativa probiotika som ökar produktiviteten hos friska smågrisar.
Med detta medium lyckades de isolera fyra arter: Lactobacillus johnsonii, Lactobacillus brevis, Enterococcus hirae Y Pediococcus pentosaceus.
På samma sätt har Báez et al. (2019) används M.R.S. för att utvärdera mjölksyrabakterier (LAB) och bifidobakterier med probiotisk potential i bröstmjölk och spädbarnsavföring.
De lyckades isolera 11 BAL och 3 Bifidobacteria sp i bröstmjölk och 8 BAL och 2 Bifidobacteria sp. i avföring. Alla uppfyllde vissa parametrar som bevisar dem som bakterier med probiotisk aktivitet.
Författarna drog slutsatsen att både bröstmjölk och avföring från uteslutande ammande barn tjänar som naturliga källor till probiotiska bakterier..
För att utvärdera kvaliteten på M.R.S. Kontrollstammar som:
Lactobacillus fermentum ATCC 9338, Lactobacillus casei ATCC 393, Bifidobacterium bifidum ATCC 11863, Lactobacillus plantarum MKTA 8014, Lactobacillus lactis MKTA 19435, Pediococcus damnosus MKTA 29358, Escherichia coli och Bacillus cereus.
De förväntade resultaten är tillfredsställande tillväxt för de första 6 bakterierna, medan E coli Y Bacillus cereus måste hämmas helt.
Ingen har kommenterat den här artikeln än.