De Biuret är ett reagens som används för bestämning av långkedjiga och kortkedjiga proteiner. Det används särskilt inom analytisk kemi och urinanalys för att undersöka koncentrationen av totala proteiner i serum, plasma och urin..
Proteinvärden kan ökas eller minskas i vissa patologier. Hypoproteinemia-symtom uppträder vanligtvis hos patienter med njursjukdom, hos undernärda patienter och hos patienter med kroniska infektioner..
Medan hyperproteinemi observeras i patologier som multipelt myelom, systemisk lupus erythematosus, bakteriell endokardit, bakteriell hjärnhinneinflammation, Waldenstroms makroglobulinemi, bland andra..
Å andra sidan beror närvaron av protein i urinen på filtrering av albumin i njurarna. Detta är ett patologiskt beteende som bör studeras.
I denna mening är Biuret mycket användbart, eftersom det gör det möjligt att kvantifiera närvaron av proteiner i serum, plasma, urin, bland många andra prover..
Även Biuret kan användas för att undersöka närvaron och koncentrationen av proteiner i dåligt undersökta prover eller prover med okänd komposition. Därför används den i stor utsträckning inom forskningsområdet.
Biuret-testet bygger på att detektera peptidbindningar. Testet äger rum i ett alkaliskt medium. Provet måste innehålla minst två peptidbindningar för att ett violettlila komplex ska bildas. Komplexet bildas av föreningen av bindningarna och kopparjonen.
Artikelindex
Biurets reagens består av kaliumhydroxid, kopparsulfat och natrium- och kaliumtartrat. Natriumhydroxid används för att alkalisera mediet, eftersom detta tillstånd är viktigt för att reaktionen ska äga rum.
De ämnen som reagerar med proteiner är kopparsulfat, medan natriumtartrat har funktionen att inte tillåta bildandet av kopparhydroxid, som tenderar att fällas ut och stör reaktionen..
Om ämnen med peptidbindningar (polypeptider eller proteiner) finns i provet kommer testet att vara positivt.
En reaktion tolkas som positiv när lösningen blir lila. Färgen framställs genom bildandet av ett komplex mellan åtminstone två peptidbindningar som har CO-NH-gruppen och koppar-katjonerna.
Det violetta komplexet kan bildas på två sätt: det ena är genom förlust av protoner från amidgrupperna som binder till metallen (depronotation) och det andra genom föreningen av syre- och kväveelektronerna som är fria och binder. Med koppar.
Denna reaktion kan variera i intensitet och färg beroende på typen av protein..
Testet kan utföras kvalitativt eller kvantitativt. I den kvalitativa formen rapporteras den som positiv eller negativ. Medan i kvantitativ form kan koncentrationen mätas med den spektrofotometriska metoden.
Reaktionen avläses mellan 540-560 nm. Färgens intensitet är direkt proportionell mot koncentrationen av peptidbindningar i provet..
-Natriumhydroxid (NaOH) 20%
-1% Cupric Sulfate Pentahydrate (CuSO4. 5HtvåELLER)
-Blandat natriumkaliumtartrattetrahydrat (KNaC4H4ELLER64HtvåELLER)
-Den måste förvaras i kyl.
-Placera 100 µl av provet eller standarden som ska analyseras i ett provrör.
-Tillsätt 2 ml natriumhydroxid.
-Blanda mycket bra.
-Tillsätt 5 ml Biuret-reagens.
-Blanda och låt stå i 25 minuter vid rumstemperatur, täck över och skydda mot ljus.
-Observera bildandet av färg eller inte och mät spektrofotometriskt.
Bovint serumalbumin kan användas som standard för att utföra kalibreringskurvan. Olika koncentrationer framställs av den. Exempelvis 25, 50, 75, 100, 125 och 150%.
Reaktionen ställs in med alla dessa kända koncentrationer och absorbansen avläses vid en våglängd på 540 nm. Med data för de kända koncentrationerna och absorbansavläsningarna görs kalibreringskurvan.
I varje bestämning eller sats av bearbetade prover rekommenderas att montera en standard. Bovint serumalbumin 0,1-2 mg / ml kan användas som kalibreringsstandard..
Mätningar görs på en spektrofotometer vid 540 nm.
Linjäriteten uppfylls upp till en koncentration av 12 g / dl.
Även om det inte är så ofta bör det noteras att vissa ämnen kan störa under genomförandet av detta test. Exempelvis kan närvaron av ammoniak hämma bildandet av färg.
På samma sätt kan andra ämnen absorberas vid samma våglängd, såsom vissa pigment..
Å andra sidan kan interferens genereras när en annan substans än peptidbindningen bildar ett komplex med kopparsaltet. Exempel: några kolhydrater och vissa lipider.
Om provet som ska analyseras innehåller någon typ av fällning måste det filtreras eller centrifugeras innan testet monteras..
Testet påverkas inte av närvaron av:
-Bilirubin upp till en koncentration av 20 mg / dl.
-Hemoglobin upp till en koncentration av 750 mg / dl.
-Dextran upp till en koncentration av 30 g / L.
-Triglycerider upp till en koncentration av 4000 mg / dl.
-Det är en enkel metod att utföra.
-Det är ett ekonomiskt test.
-Har hög specificitet för proteiner.
-Lite störningar.
Det har dålig känslighet för att detektera låga mängder protein. Arbetet utfört av Fuentes och medarbetare bekräftar att Biuret-testmetoden har en detektionsgräns på 1 mg / ml protein och en kvantifieringsgräns på 3 mg / ml.
Annan forskning vid University of Amazonia rapporterar dock mycket lägre värden. Detektionsgränsen som rapporterats av studien är 0,020 mg / ml och kvantifieringsgränsen är 1,33 mg / ml..
Biuret-reagenset eller testet används för bestämning av proteiner i kliniska och icke-kliniska prover i rutin- och forskningslaboratorier.
I många patologier är det viktigt att bestämma koncentrationen av totala proteiner i kliniska prover, som kan vara höga eller låga.
De är förhöjda i:
-Multipelt myelom,
-Systemisk lupus erythematosus,
-Bakteriell endokardit,
-Bakteriell meningit,
Waldenstroms makroglobulinemi, bland andra.
Det minskar i:
-Njurinsufficiens,
-Människor med allvarliga grader av undernäring,
-Patienter med bland annat kroniska infektioner.
De vanligaste kliniska proverna är serum, plasma och urin. Det normala värdet av proteiner i serum eller plasma är 6,0-8,8 gr / dl.
Koncentrationen av protein i urinen hos vuxna överstiger inte siffran 150 mg / 24 timmar.
Spädbarn: < a 0,50 mg
Barn 2 år och äldre: index: 0,20 mg
Vuxna: < 0,2 mg
Biuret-reaktionen kan användas för många typer av icke-kliniska prover, såsom mejeriprodukter, motgift eller något okänt ämne för vilket du vill undersöka närvaron av proteiner..
Ingen har kommenterat den här artikeln än.