De Etidiumbromid Det är en fluorescerande och aromatisk förening som på grund av sin kemiska struktur har förmågan att interkalera mellan DNA-kedjor. Det binder också till mycket vikta RNA-molekyler. Detta möjliggör en interaktion mellan detta salt och de kvävehaltiga baserna..
Etidiumbromid absorberar ultraviolett ljus i ett våglängdsområde från 210 nm till 285 nm, vilket avger en orange fluorescens på 605 nm. Intensiteten i dess fluorescens ökar upp till 20 gånger när den interagerar med DNA.
På grund av dess fluorescensegenskap används etidiumbromid för att visualisera separerade DNA-fragment genom agaroselektrofores (övre bild); teknik introducerad oberoende av Aaij och Borst (1972) och Sharp (1973).
Etidiumbromid, när den är interkalerad mellan DNA-kedjor, kan också hindra dess duplicering och transkriptionsprocesser; och därför vara orsaken till genereringen av mutationer. Det finns dock inga avgörande bevis som stöder detta antagande..
Artikelindex
I den övre bilden har vi molekylstrukturen av etidiumbromid representerad av dess strukturformel.
Molekylen är nästan helt platt, eftersom alla atomer i systemet som bildas av de tre ringarna (fenantridin) och den positivt laddade kväveatomen har sp-hybridiseringtvå. Men det händer inte på samma sätt med deras substituentgrupper.
Fenylgruppen längst till höger, aminogrupperna och etylgruppen bundna till det laddade kvävet är ansvariga för att systemet absorberar UV-våglängderna som senare karakteriserar fluorescensen hos etidiumbromid..
Å andra sidan, notera att deras intermolekylära interaktioner huvudsakligen styrs av elektrostatiska attraktioner; och i mindre utsträckning hålls de samman av ringarnas dispersiva krafter i London.
Etidiumbromid.
IUPAC-namn: 3,8-Diamino-5-etyl-6-fenylfenantridiniumbromid.
Synonymer: homide bromide och Dromilac.
CtjugoettHtjugoN3Br
Mörkröda kristaller eller förekommer som ett brunt pulver.
Bitter.
Fast luktfri.
260 - 262 ºC (sönderdelas).
> 100 ºC
40 g / L vid 25 ° C i vatten och i etanol 2 mg / ml.
0,34 g / cm3
1,210-12 mmHg vid 25 ° C (uppskattat).
Log Kow = - 0,38
När det värms upp till sönderdelning avger etidiumbromid en mycket giftig rök av vätebromid och kväveoxider..
Stabil och oförenlig med starka oxidationsmedel.
1,67 (uppskattat).
4-7 i en 2% lösning i vatten.
Polymeraskedjereaktionen, PCR, gör det möjligt att erhålla många kopior på ett exponentiellt sätt med utgångspunkt från ett DNA-fragment. Tekniken är baserad på egenskapen hos DNA-polymerasenzymet för att replikera DNA-strängar från dess fragment som fungerar som en mall..
Det är en teknik som har många tillämpningar, inklusive detektion av mutationer relaterade till ärftliga sjukdomar; faderskapstest; identifiering av en person som begått ett brott etc..
Etidiumbromid hjälper till att identifiera DNA-fragment, produkter av deras enzymatiska nedbrytning som kan användas i PCR-tekniken.
Etidiumbromiden införlivas i gelén innan elektrofores utförs. Föreningen är inklämd mellan DNA-banden och producerar en fluorescens när den utsätts för ultraviolett ljus som tjänar till att avslöja DNA-fragmenten som separeras i elektrofores.
Elektroforesens fluorescensmönster fungerar som en orientering om ursprunget till DNA-fragmenten. Bindningen av etidiumbromid till DNA ändrar konformationen, laddningen, vikten och flexibiliteten hos DNA-molekylen, vilket resulterar i en minskning av makromolekylens rörlighet..
Denna effekt ökar när storleken på DNA-fragmentet ökar..
Etidiumbromid började användas vid behandling av trypanosomiasis hos nötkreatur på 1950-talet, under namnet Homidio. Därifrån kom namnet homide bromide som en synonym för ethidiumbromid.
Den terapeutiska användningen av etidiumbromid är baserad på dess toxicitet för mitokondrier. Detta manifesteras av en minskning av antalet kopior av mitokondriellt DNA..
Etidiumbromid binder till DNA-molekylerna i trypanosomkinetoplasten och ändrar dess konformation till DNAz. Denna form av DNA är dödlig eftersom dess replikation är hämmad.
Direkt injektion av etidiumbromid i cisternen magna gav en reproducerbar akut myelinförlustskada i hjärnstammen hos råttor. Samma ryggmärgsinjektion hos katter gav en skada jämförbar med den som ses hos råttor.
Multipel skleros är en autoimmun sjukdom i nervsystemet, där immunsystemet förstör myelin, ett ämne som täcker nervceller..
Etidiumbromid anses vara en giftig förening, eftersom det vid inandning orsakar akut irritation i luftvägarna. Vid kontakt med huden kan etidiumbromid orsaka inflammation och / eller missfärgning..
Under tiden i ögonen orsakar akut exponering irritation, rodnad och ögonsmärta. Därför rekommenderas att materialet som används med etidiumbromid hanteras med säkerhetsdatabladet (MSDS)..
Etidiumbromid anses vara en mycket mutagen förening, eftersom den kan interkaleras i DNA kan påverka dess duplicering och transkription och orsaka mutationer; och till och med har det påpekats en möjlig cancerframkallande verkan.
AMES-testet upptäckte endast induktion av mutationer av etidiumbromid i bakterier när ett leverhomogenat användes i testet..
Detta fick oss att tro att det inte är direkt ansvarigt för uppkomsten av mutationer i bakterier, men att dessa kan vara en konsekvens av effekten av någon metabolit som genereras i interaktionen mellan etidiumbromid och leverhomogenatet..
Å andra sidan fastställde The Natural Toxicology Program att etidiumbromid inte var mutagen för råttor och möss. Trots detta minskas dess användning i laboratorierna som använder den i sin forskning..
Koncentrationen av etidiumbromid som används i undersökningarna är emellertid en tusendel av koncentrationen av dosen som ges till nötkreatur vid behandling av trypanosomiasis utan att mutationer uppträder..
Ingen har kommenterat den här artikeln än.