De fosfatbuffert, BPS eller fosfatbuffertlösning Det är en buffert- och isotonlösning vars funktion är att bibehålla pH och osmotiskt tryck så nära den naturliga biologiska (fysiologiska) miljön som möjligt. Förkortningen PBS står för fosfatbuffrad saltlösning..
PH och osmolaritet är två mycket viktiga aspekter som måste kontrolleras i vissa laboratorieprotokoll. I fallet med pH är det viktigt att det kontrolleras, särskilt i biokemiska reaktioner, eftersom dessa kan variera eller inte utföras om reaktanterna har ett olämpligt pH.
Under tiden är kontrollen av osmolaritet viktigt, särskilt när man arbetar med levande celler, eftersom plasmamembranen i cellerna reagerar enligt koncentrationen av lösta ämnen i vilka de finns..
Om cellerna överförs till ett hypertoniskt medium torkar de ut, eftersom vattengradienten kommer att transporteras till den sida där det finns en högre koncentration av lösta ämnen. Om celler å andra sidan placeras i ett hypotoniskt medium, absorberar cellerna vätska tills de lyseras..
Det är därför PBS-bufferten används för laboratorieprotokoll som kräver underhåll av celler. in vitro, på detta sätt skadas inte cellerna.
PBS består av en kombination av salter, såsom natriumklorid, natriumfosfat, kaliumklorid och kaliumfosfat. PBS-sammansättningen kan variera beroende på protokollet..
Artikelindex
I grund och botten är saltfosfatbuffertens funktion att upprätthålla ett konstant fysiologiskt pH tillsammans med en elektrolytkoncentration som liknar den som finns i kroppen..
I denna miljö kan cellerna förbli stabila, eftersom fysiologiska förhållanden simuleras så mycket som möjligt..
Andra föreningar kan tillsättas till den ursprungliga PBS-formuleringen om det är nödvändigt, till exempel är tillsatsen av EDTA till bufferten användbar för tvättning av röda blodkroppar i korsinkompatibilitetstestet..
EDTA förhindrar att fraktionen av komplement Cl som finns i serumet klyvs och lyseras till de röda blodkropparna, det vill säga det undviker falska inkompatibilitetsresultat. Dessutom hjälper EDTA till att dissociera celler.
Mängden salter som måste vägas för beredningen av PBS-fosfatbuffrad saltlösning beror på mängden som måste beredas:
För en liter lösning:
Väga:
80,6 g NaCl,
2,2 g KCl,
11,5 g NatvåHPO4,
2,0 g KHtvåHPO4
Placera de tunga salterna i en bägare, tillsätt tillräckligt med vatten (80%) och blanda på omrörningsplattan med magnetstång tills salterna är upplösta..
Filtrera för att avlägsna olösta partiklar. Använd filter med 0,45 µm porer. Autoklav och fördela aseptiskt i laminär flödeskåpa i glasburkar med lock.
10X-lösningen (koncentrerad) justerar inte pH. Justeringen görs en gång utspädd till 1X PBS-buffertkoncentration, (1:10 utspädning).
1X PBS kan beredas direkt, väga motsvarande mängder av varje salt, eller det kan beredas genom utspädning av stamlösningen (1:10) med sterilt destillerat vatten..
-För att direkt bereda en liter 1X PBS fosfatbuffrad saltlösning, väg:
8,06 g NaCl,
0,22 g KCl,
1,15 g NatvåHPO4,
0,20 g KHtvåHPO4
Fortsätt enligt beskrivningen för den koncentrerade lösningen. Därefter måste pH justeras. För att göra detta, mät pH och använd syra (HCl) eller bas (NaOH) för att sänka eller höja pH efter behov, tills det är 7,4.
Syran eller basen tillsättes dropp för droppe under övervakning av pH-värdet för lösningen med användning av en pH-mätare. Filtrera, autoklavera och fördela aseptiskt i koniska rör eller burkar efter behov.
-För att förbereda 1X PBS från 10X stamlösning:
Gör en 1:10 utspädning. Till exempel, för att förbereda 1 liter 1X PBS, mäta upp 100 ml av stamlösningen och tillsätt 700 ml sterilt destillerat vatten. Justera pH och fyll mängden vatten upp till 1000 ml.
Den beredda PBS-bufferten är färglös och transparent.
Den dagliga PBS kan lagras vid rumstemperatur och resten i kylen.
För 100 ml 1 molär HCL (saltsyra).
Mät 91 ml destillerat vatten och placera det i en 250 ml bägare.
Mät 8,62 ml koncentrerad HCl och tillsätt det långsamt i bägaren som innehåller vattnet (gör det aldrig tvärtom). Vidta relevanta biosäkerhetsåtgärder vid hantering av starka syror (mycket frätande ämne).
Blanda i 5 minuter, helst med en omrörningsplatta med en magnetstång inuti glaset. Överför till en 100 ml ballong och fyll upp till 100 ml med HtvåEller destillerat.
För 100 ml NaOH (natriumhydroxid) 10 mol.
Mät 40 ml destillerat vatten och placera det i en 250 ml bägare. Mät 40 g NaOH och tillsätt till vattnet. Blanda med en omrörningsplatta med en magnetstång inuti glaset.
Överför till en 100 ml mätkolv och fyll upp till märket med destillerat vatten. Följ biosäkerhetsbestämmelserna, eftersom denna reaktion är exoterm (den frigör energi i form av värme).
Om du vill bereda andra mängder fosfatlösning kan du läsa följande tabell:
Används främst i cellbiologi, immunologi, immunhistokemi, bakteriologi, virologi och forskningslaboratorier.
Det är idealiskt för celltvätt genom centrifugering (röda blodkroppar), cellmonolag-tvättar, i spektroskopiska ellipsometri-tekniker, vid kvantifiering av bakteriebiofilmer, vid upprätthållande av cellkulturer för virus, som en tvättlösning i den indirekta immunfluorescenstekniken. i tekniker för karakterisering av monoklonala antikroppar.
Det används också för att transportera celler eller vävnader, som ett utspädningsmedel för cellräkning, beredning av cellulära enzymer (trypsin), som ett utspädningsmedel för biomolekyluttorkningsmetoden och för att bereda andra reagens..
Å andra sidan visade Martin et al. 2006 att PBS är användbart i kriminaltekniska laboratorier, speciellt vid återvinning av spermier från vaginala utstryk, eller vid återvinning av vaginala celler från penisutstryk. På detta sätt kan det fastställas om det har varit ett sexuellt förhållande.
-Vissa PBS-buffertar innehåller ett ämne som kallas natriumazid som konserveringsmedel. Denna förening kan generera explosiva ämnen om den kommer i kontakt med bly eller koppar. Av denna anledning måste särskild försiktighet iakttas vid kassering av detta reagens i avloppet. Om det kastas på detta sätt måste mycket vatten tillsättas för att späda ut det så mycket som möjligt..
-Zink bör inte tillsättas fosfatbufferten eftersom det orsakar att vissa salter fälls ut.
-Wangen et al. År 2018 fastställde att användningen av PBS inte var lämplig för att tvätta primär akut myeloid leukemi (AML) celler extraherade från perifert blod, på grund av det faktum att många celler förloras genom lys, med en stor minskning av proteinmaterialet.
Därför bestämde de att primära AML-celler inte skulle tvättas med PBS efter lagring i flytande kväve..
Ingen har kommenterat den här artikeln än.