De Kan Grünwald-Giemsa fläcka o Pappenheim är en differentiell färgningsteknik som blandar Giemsa och May Grünwald-reagens. Det används för differentiering av normala och onormala blodkroppar i perifert blod och benmärgsutstryk samt för färgning av histologiska sektioner och cytologiska prover..
Båda reagensen -Giemsa och May Grünwald- härrör från färgning av Romanowsky-typ, en teknik som baseras på kombinationen av sura och basiska färgämnen..
Giemsa förbättrade tekniken genom att stabilisera blandningen av eosin, metylenblått och deras derivat med glycerol. Istället använder May Grünwald eosin och metylenblått, med metanol som lösningsmedel. Denna strategiska kombination har gett utmärkta resultat.
Även om det i termer av observation av cellmorfologi verkar på samma sätt som Giemsa och Wright-fläckarna, förbättrar denna teknik de tidigare genom att förfina färgningen av parasiterna som orsakar malaria, Chagas sjukdom, leishmaniasis och trichomoniasis..
Dessutom har det visat sig vara en mycket användbar teknik för den cytologiska studien av spermatisk vätska. Det har sticker ut inte bara genom att visa spermatozoernas morfologiska egenskaper utan också genom att möjliggöra differentiering av leukocyter, epitelceller och spermatogenesceller med stor effektivitet..
Artikelindex
Tekniken följer grunden för Romanowsky-fläckar, där sura färgämnen har selektiv affinitet för basiska cellulära komponenter och sura komponenter lockar basiska fläckar..
Förklaras på ett annat sätt, både cellstrukturer och färgämnen har positiva eller negativa elektriska laddningar; som avgifter avvisar och olika avgifter lockar.
Till exempel är grundläggande färgämnen som metylenblått positivt laddade och lockas av negativt laddade strukturer. Det är därför detta färgämne fläckar kärnor som är rika på DNA och RNA som har negativt laddade fosfatgrupper..
Granulerna av segmenterade basofiler och cytoplasman i mononukleära vita blodkroppar innehållande RNA färgas också..
På samma sätt bär syrafärgämnet en negativ laddning, varför den binder till positivt laddade strukturer såsom erytrocyter och granulat av segmenterade eosinofiler. När det gäller granulerna i de segmenterade neutrofilerna fixerar dessa båda färgämnena.
I denna teknik existerar en kombination av reaktioner mellan ortokromatiska och metakromatiska färgämnen. Ortokromatika (eosin och metylenblått) binder till cellstrukturen som de är relaterade till och ger en stabil färg som inte varierar.
Å andra sidan varierar metakromatika (derivaten av metylenblått azurblå A och azurblå B) sin ursprungliga färg när de väl är fästa vid den specifika strukturen, och det kan till och med finnas en mängd olika nyanser.
Slutligen kräver steget som May Grünwald-lösningen tar närvaro av vatten, eftersom utan detta kommer färgämnet att tränga igenom strukturerna men inte stelna. För att detta ska hända måste färgämnet bli polärt eller jonisera och därmed kunna fälla ut och binda till relaterade strukturer..
- Mikroskopglas.
- Broar för färgning.
- May-Grünwald-lösningen.
- Giemsa fläck.
- Destillerat vatten.
0,25 g eosin-metylenblått (fläck enligt May Grünwald) bör vägas upp och lösas i 100 ml metanol. Sedan blandas preparatet i 1 timme och får vila i 24 timmar. När tiden är ute läcker den.
För att tillämpa tekniken måste May Grünwald-färgämnet spädas enligt följande: för 200 ml utspätt färgämne, mät 30 ml av den koncentrerade lösningen, tillsätt 20 ml buffertlösning och 150 ml destillerat vatten justerat till pH7,2-7,3. Senare blandas den och filtreras.
0,5 g azurblå-eosin-metylenblått (fläck enligt Giemsa) måste vägas, lösas i 50 ml metanol och 50 ml glycerin tillsättas till blandningen.
För att utföra tekniken späds den 1:10 med buffertlösning och får stå i 10 minuter. Kan filtreras vid behov.
De bör vägas:
- 40 mg kaliumdivätefosfat (KH2PO4).
- 151 mg di-natriumvätefosfat 12-hydrat (Na2HPO4).
Båda föreningarna löses i 100 ml vatten.
Det finns två lägen: en klassiker och en snabb.
De tekniker som beskrivs här är en riktlinje, men det bör beaktas att procedurerna och färgningstiderna varierar beroende på det kommersiella företaget som distribuerar reagensen. Det är tillrådligt att följa de steg som strikt anges av varje kommersiellt hus.
1- Täck utstrykningen med ett tunt lager av May Grünwald-lösningen i 4 minuter.
2- Ta bort färgämnet och tvätta med destillerat vatten.
3- Lägg ett lager utspädd Giemsa (1:10) i destillerat vatten i 15 minuter.
4- Ta bort färgämnet och tvätta med destillerat vatten.
5- Låt torka och observera i mikroskopet.
Tekniken kräver att reagensen och tvättlösningarna har ett pH justerat till 7,2-7,3, så att färgämnena för cellstrukturerna inte förvrängs och den förväntade slutfärgen inte varierar..
Denna teknik används av kliniska laboratorier för att fläckar perifert blod och benmärgsutstryk, vävnadsavsnitt och cytologier..
Inom det hematologiska området är denna teknik av avgörande betydelse vid studier av cellernas abnormiteter när det gäller form, storlek och antal. Det är ett mycket värdefullt verktyg för diagnos av vissa sjukdomar, såsom leukemier och anemier.
Dessutom är det av enastående nytta när man letar efter parasiter i hematologiska områden (Plasmodium sp Y Trypanosome cruzi) eller histologisk (Leishmanias sp).
När det gäller vaginal cytologi är denna teknik särskilt fördelaktig för observation av Trichomonas vaginalis. Detta är ett viktigt resultat, eftersom dess närvaro simulerar bilder av karcinom. in situ som sedan försvinner när parasiten avlägsnas.
Det har varit ett idealiskt verktyg för studier av spermieprover, eftersom det ger värdefull information om spermiernas kvalitet.
Uppgifterna har huvudsakligen att göra med antal och morfologi, såväl som de samtidig celler som kan finnas och som är av vital betydelse, såsom könsceller, leukocyter och epitelceller..
Med denna analys är det möjligt att beskriva abnormiteter observerade i spermierna i huvudet, nacken, mittstycket och huvuddelen..
Dessutom kan de också hjälpa till att visa fall av hemospermi (närvaro av röda blodkroppar i sperma) och leukospermi eller piospermi (ökat antal leukocyter i sperma).
Ingen har kommenterat den här artikeln än.