De gall esculin agar Det är ett selektivt och differentierat fast odlingsmedium. Det används som ett diagnostiskt test för att bestämma förmågan hos en viss mikroorganism att växa i ett medium som innehåller galla och också bryta ner glukosid esculin i esculetin och glukos..
Detta diagnostiska test används för att differentiera arter av släktet Streptococcus som tillhör grupp D (galla esculinpositivt), från andra grupper av Streptococcus som reagerar negativt på detta test..
Det bör noteras att viss Streptococcus från viridans-gruppen kan hydrolysera esculin, men inte kan växa i närvaro av galla i en koncentration av 40%, därför är reaktionen för denna grupp negativ i detta medium.
Å andra sidan är gallaxkulinmediet också användbart för diagnos av Listeria monocytogenes eller arter av Aerococcus sp, eftersom dessa mikroorganismer är galla esculin-positiva.
Esculin gallagar består av pepton, köttextrakt, oxgalla, esculin, järncitrat, agar och destillerat vatten. Vissa kommersiella hus inkluderar natriumazid i mediet.
Mediet kan beredas i laboratoriet om du har alla föreningar separat eller det kan framställas från det kommersiella dehydratiserade mediet..
Artikelindex
Galle-esculinmediet innehåller peptoner och köttextrakt, båda föreningarna ger nödvändiga näringsämnen för tillväxt av mikroorganismer.
Den innehåller också esculin; Denna förening är en glukosid bildad genom föreningen av en enkel monosackarid (glukos) med en förening som kallas 6,7-dihydroxikumarin eller esculetin (aglukon), bunden av en acetal- eller glukosidbindning.
Testet baseras på att visa om bakterierna kan hydrolysera esculin. Om detta händer bryts esculin ned i esculetin och glukos. Esculetina reagerar med det järn som finns i mediet och bildar en mörkbrun, nästan svart förening.
Detta innebär att järncitrat fungerar som en reaktionsutvecklare. Denna egenskap gör gall esculin-agar till ett differentiellt medium..
För sin del är galla en hämmare som förhindrar tillväxt av vissa mikroorganismer, därför måste bakterierna, innan de splittrar esculin, kunna växa i närvaro av galla. Därför anses detta medium vara selektivt.
De bakterier som kan utvecklas i denna miljö är främst de som lever i tarmmiljön.
I denna mening lägger vissa kommersiella företag natriumazid till mediet för att ytterligare hämma tillväxten av enteriska gramnegativa baciller, vilket ökar selektiviteten hos mediet för tillväxt av Streptococcus..
Slutligen ger agaren den fasta konsistensen till mediet och vatten är lösningsmedlet för föreningarna..
Väga:
5 g peptoner
3 g köttextrakt
40 g nötgalla
1 g esculin
0,5 g järncitrat
15 g agar
1000 ml destillerat vatten
Om du tillsätter natriumazid, väga 0,25 g / liter och tillsätt till blandningen.
Lös upp komponenterna i liter destillerat vatten, värm tills föreningarna är helt upplösta. Fördela 5 ml i 16 x 125 mm provrör med skruvlock. Autoklav vid 121 ° C, 15 pund tryck i 15 minuter.
Ta bort från autoklaven och luta rören på ett stöd så att agaren stelnar i en bred räffla.
Förvara i kylskåp tills användning. Ta upp till rumstemperatur innan sådd.
Agarplattor med gall esculin kan också framställas; i detta fall autoklaveras hela blandningen i en kolv och fördelas därefter i sterila petriskålar. De får stelna och förvaras i kylen..
Mediets pH måste vara 6,6 ± 0,2.
Väg det belopp som anges av insatsen. Detta kan variera från ett företag till ett annat. Fortsätt sedan på samma sätt som proceduren som förklaras ovan.
Mediets pH bör vara 6,6 ± 0,2. Färgen på det uttorkade mediet är ljusbeige och det beredda mediet är mörkt bärnstensfärgat.
Galleskiljemediet används huvudsakligen för att differentiera grupp D Streptococcus (gälleskulinpositiv), från resten av Streptococcus-grupperna (gälleskulin-negativ).
Kombinera det hypersaltade buljongtillväxtprovet med galleskulintestet kan användas för att identifiera en speciell grupp av grupp D Streptococcus som heter Enterococcus.
Denna speciella grupp av Streptococcus tillhör grupp D i det nämnda släktet och de kan hydrolysera esculin i närvaro av galla liksom resten av medlemmarna i grupp D, men de kan också utvecklas i ett hypersaltat medium (BHI med klorid av 6,5% natrium), en egenskap som gör skillnad.
Därför kallas streptokocker som hydrolyserar esculingalla men inte växer i hypsaltad buljong icke-enterokocker grupp D streptokocker..
Inokulera mediet helst från en ren Todd-Hewitt 24-timmarsbuljong.
Tillsätt 2 droppar till ytan av mediet med en Pasteur-pipett och sprid ut i mediet med en platinaslinga..
Inkubera vid 35 ° C i 48 timmar, medan inkubationstiden är fullbordad kan den övervakas för att se om det finns en positiv reaktion. Om reaktionen vid slutet av tiden förblir negativ kan den inkuberas i upp till 72 timmar.
Positiv reaktion: Utseende av en mörkbrun, nästan svart färg i flöjtens näbb (i fallet med rörprovet) eller svärtning av agaren runt kolonierna (i fallet med plattprovet).
Negativ reaktion: ingen svartning av mediet eller svart visas i mindre än hälften av röret efter 72 timmars inkubation. Å andra sidan bör bakterietillväxt i mediet utan att den svarta färgen ser ut betraktas som ett negativt test..
För att utvärdera kvaliteten på mediet, en stam av Enterococcus faecalis ATCC 29212 som en positiv kontroll och en Streptocococus-stam som inte tillhör grupp D som en negativ kontroll.
-Medier som inte innehåller natriumazid tillåter tillväxt av enteriska gramnegativa stavar. Vissa av dem kan svärta mitten.
- Vissa kommersiella hus tillför låg koncentration av galla (10%) och av denna anledning kan vissa Streptococcus som inte tillhör grupp D utvecklas i mediet och hydrolysera esculin, vilket kan generera tolkningsfel..
Ingen har kommenterat den här artikeln än.