Aggelfundament, beredning och användning av majsmjöl

2186
Simon Doyle
Aggelfundament, beredning och användning av majsmjöl

De majsmjölsagar är ett fast odlingsmedium, med låg näringskraft, användbart för underodling av vissa svampar och för demonstration av klamydosporer i komplex av stammar Candida albicans. På engelska är det känt som Corn Meal Agar.

Det konventionella majsmjölsmediet har en mycket enkel komposition, det innehåller majsmjöl, agar-agar och vatten. På grund av dess låga näringsnivå är den idealisk för användning vid underhåll av svampstammar under måttliga perioder, särskilt svarta svampar..

A. Grafisk framställning av Candida albicans-komplexet på majsmjölagar. B. Chlamydosporer av Candida albicans-komplexet sett under mikroskopet, bildat på majsmjölsagar. Källa: A. GrahamColm [CC BY-SA 3.0 (https://creativecommons.org/licenses/by-sa/3.0)♡/By: CDC / Dr. William Kaplan, med tillstånd: Public Health Image Library.

Sporulering av komplexet Candida albicans det är gynnat i detta medium om 1% av Tween 80 tillsätts under framställningen av agaren. Bildningen av klamydosporer är karakteristisk för denna art och praktiskt taget den enda som påverkar människor..

Det finns andra arter som bildar klamydosporer, men det är osannolikt att det påverkar människor, t.ex. Candida australis, närvarande i pingvinavfall, eller C. clausenii, vilket är en sällan påträffad saprofyt. På samma sätt undantagsvis arten C. stellatoidea Y C. tropicalis kunde bilda dem.

Å andra sidan gynnar tillsats av glukos till majsmjölsmedlet bildandet av pigment i stammar av Trichophytom rubrum.

Det är viktigt att notera att det finns svampar som inte bildar hyfer eller pseudohyfer i majsmjölagar, såsom Cryptococcus neoformans, skiljer sig från andra genrer.

Cornmeal agar kan vara hemlagad i laboratoriet eller kommersiella medier kan också användas..

Artikelindex

  • 1 Motivering
  • 2 Förberedelse
    • 2.1 Kommersiell majsmjölagar
    • 2.2 Majsmjölagar med Tween 80
    • 2.3 Majsmjölagar med glukos
  • 3 Använd
    • 3.1 Sådd
    • 3.2 Demonstration av klamydosporer
    • 3.3 Underhåll av svampstammar
  • 4 Kvalitetskontroll
  • 5 Begränsningar
  • 6 Referenser

Grund

Majsmjöl är substratet, agar är stelningsmedlet och vatten är lösningsmedlet..

Cornmeal agar kan kompletteras med tween 80 (sorbitanmonooleat eller polysorbat polyester 80). Denna förening minskar mediets ytspänning på grund av dess emulgerande kraft.

Det skapar också en fientlig miljö som hämmar överdriven cellmultiplikation och stimulerar tillväxten av hyfer, vilket också gynnar produktionen av klamydosporer; de senare betraktade motståndsstrukturer. Denna struktur hjälper till att identifiera arten av Candida albicans.

För sin del ökar glukos i detta medium pigmentbildningsförmågan hos vissa svampar..

Det bör noteras att det medelstora glukosmjölet inte tjänar till att demonstrera klamydosporer i cCandida albicans-komplex.

Förberedelse

Hemlagad förberedelse av majsmjölagar

Väg ut 47 g gult majsmjöl och lös upp i 500 ml destillerat vatten. Värm upp till 60 ºC under omrörning av beredningen under cirka en timme. Filtrera sedan genom en bit gasväv och bomull, eventuellt kan den filtreras igen genom att bereda preparatet genom ett Whatman nr 2 filterpapper.

Fyll på volymen till 1000 ml med destillerat vatten. Tillsätt 17 g agar-agar, värm tills det är upplöst. Autoklav i 15 minuter vid 121 ºC.

Servera i sterila petriskålar. Förvaras i kylskåp.

Färgen på det beredda mediet är vitaktigt med ett klumpigt utseende.

Om du vill bereda majsmjöl med glukos till beredningen som beskrivs ovan, tillsätt 10 g glukos.

Kommersiell majsmjölagar

Väg 17 g av det torkade mediet och lös upp det i 1 liter destillerat vatten. Blandningen kan värmas, skaka försiktigt för att lösas upp helt. Sterilisera i en autoklav vid 121 ºC, vid 15 kg, i 15 minuter.

Häll i sterila petriskålar. Låt stelna. Vänd och förvara i kylskåp tills användning. Temperera före användning.

PH bör vara 6,0 ± 0,2 vid 25 ºC.

Agarmjöl med Tween 80

För att uppfylla ISO 18416 måste majsmjölagar beredas enligt följande:

Väg 65 gram per liter och tillsätt 10 ml Tween 80. Värm upp och koka i några minuter tills det är upplöst, var noga med att inte överhettas för mycket. Sterilisera vid 121 ºC i 15 minuter.

Agelmjöl med glukos

För att förbättra den kromogena kraften hos kolonier i Trichophyton rubrum och skilja dem från T. mentagrophytes, 0,2% glukos kan tillsättas till den ursprungliga formeln. Du behöver inte ha Tween 80, eftersom glukos hämmar bildandet av klamydosporer.

Använda sig av

Huvudsakligen är användningen av majsmjölagar avsedd för studier av Candida-stammar, vilket hjälper deras identifiering genom den karakteristiska observationen av klamydosporer i albicans-arten. Det vill säga användningen av denna agar fungerar som en hjälpmetod för identifiering av dessa jästar..

Både saprofytiska och patogena arter kan utvecklas på denna agar, men var och en bildar karakteristiska mycelstrukturer. Exempelvis producerar arter av släktet Torulopsis inte mycelium och reproducerar endast genom blastoconidia..

På samma sätt producerar arterna Trichosporon och Geotrichum artroconidia på majsmjölagar och det är ibland svårt att skilja mellan den ena och den andra..

Arthroconidia av släktet Geotrichum producerar en förlängning av hyfer som liknar en hockeykäpp..

Produktionen av pigment med användning av majsmjölagar kompletterat med glukos är användbar vid identifiering av Trichophytom rubrum.

Sådd

Misstänkta Candida-kolonier som erhållits i det primära odlingsmediet - Sabouraud agar - från kliniska prover, bland annat kosmetika, jordar odlas på majsmjölagar. Mediet ympas och inkuberas vid 22 ° C under 24 till 48 timmar. Inkubationstiden kan förlängas vid behov.

Chlamydospore demonstration

För detta ändamål måste majsmjölagaren med Tween 80 ympas med Dalmau-tekniken. Denna metod består i att ta en del av den misstänkta kolonin med platinahandtaget och göra tre parallella snitt i mitten och hålla handtaget vid 45 °. Skärningarna måste vara åtskilda med ett avstånd på 1 cm från varandra.

Därefter placeras ett tidigare flammat täckobjekt på strimmorna som såddes så att hälften är täckt och den andra avslöjas.

Inkubera de ympade plattorna vid 30 ° C i 48-72 timmar och undersök sedan mikroskopiskt genom täckglaset..

Underhåll av svampstammar

För underhåll av stammar förvaras sådd och odlade tallrikar i kylskåp (4 till 8 ºC). På detta sätt kan de pågå i flera veckor och användas för undervisnings- eller forskningsändamål..

QA

För sterilitetskontrollen inkuberas en platta utan ympning vid rumstemperatur, det förväntas att det inte blir någon tillväxt eller färgförändring.

För kvalitetskontroll, kända stammar som: Staphylococcus aureus, ATCC 6538, Escherichia coli ATCC 25922, Aspergillus niger ATCC 16404, Candida albicans ATCC 1023, Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763.

De förväntade resultaten är delvis hämning för S. aureus Y E coli. Medan tillfredsställande tillväxt förväntas i resten av stammarna.

Aspergillus niger växer med svarta och sporulerade kolonier under en ungefärlig tid av 5 dagars inkubation.

Candida albicans jästkolonier med chlamydosporeproduktion.

Saccharomyces cerevisiae producera stora jästceller.

Begränsningar

En gul fällning bildas längst ner på plattan som inte bör förväxlas med kolonier..

Referenser

  1. Neogen Laboratories. Agar för majsmjöl. Finns på: foodsafety.neogen.com.
  2. Culture Media Microkit. Majsmålagar. Finns på: Medioscultivo.com.
  3. Linares M, Solís F. Yeast Identification Guide. Finns på: http: //www.guia.revibero.
  4. Urcia F, Guevara M. Rev. Perú Med.Exp. Folkhälsa, 2002; 19 (4): 206-208. Finns på: Scielo.com
  5. Casas-Rincón G. Allmän mykologi. 1994. 2: a upplagan Central University of Venezuela, Library Editions. Venezuela Caracas.
  6. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnos. 12 utgåva Redaktionellt Panamericana S.A. Argentina.
  7. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnos. 5: e upplagan Redaktionellt Panamericana S.A. Argentina.
  8. Castillo E. Jämförande studie av några makro- och mikroskopiska metoder för isolering och igenkänning av släktet Candida. Colombianska Rev. av farmaceutiska kemiska vetenskaper. 1970; 3 (1): 33-57. Finns på: Ciencias.unal.edu.co

Ingen har kommenterat den här artikeln än.