De malonat buljong Det är det flytande odlingsmediet som används för det diagnostiska testet (malonattest), som används för att differentiera vissa släktingar av Enterobacteriaceae-familjen. Det skapades av Leifson 1933 och modifierades senare av Ewing, som tillförde en liten mängd dextros och jästextrakt till den ursprungliga formeln..
Mediet består för närvarande av jästextrakt, ammoniumsulfat, dikaliumfosfat, monokaliumfosfat, natriumklorid, natriummalonat, dextros och bromotymolblått. Detta test ingår i allmänhet i det biokemiska identifieringsbatteriet för Enterobacteriaceae, vilket hjälper till att differentiera vissa släkt och arter..
Malonattestet baseras främst på förmågan hos vissa mikroorganismer att använda natriummalonat som enda kolkälla och ammoniumsulfat som kvävekälla..
Malonattestet är vanligtvis positivt hos vissa arter av släktena Enterobacter, Klebsiella och Citrobacter. Medan de flesta arter av släktena Escherichia, Salmonella, Shigella, Edwardsiella, Yersinia, Serratia, Morganella, Proteus och Providencia ger negativ reaktion.
Artikelindex
Malonattestet består av att visa de bakterier som kan använda natriummalonat som enda kolkälla och ammoniumsulfat som kvävekälla..
De flesta enterobakterier som inte använder malonat kan växa i detta medium och tar dextros och jästextrakt som näringsämnen..
I detta fall kommer varje försök till alkalisering genom användning av peptoner att motverkas genom produktion av syror som genereras genom fermentering av dextros. På samma sätt fungerar dikalium och monokaliumfosfater som en buffert och håller pH på 6,7.
Det är därför, när testet är negativt, förblir buljongen samma originalfärg (grön). Vid sällsynta tillfällen kan mediet bli surt på grund av dextrosjäsning; utan användning av peptonerna och pH-indikatorn skulle det vända mediumets färg mot gul. För att detta ska ske måste pH sjunka till 6.
När detta test nu är positivt sägs det att mikroorganismen använde malonat och ammoniumsulfat som kol respektive kvävekällor utan att använda de andra komponenterna..
I detta fall blir mediet alkaliskt på grund av frisättningen av natrium och den därav följande bildningen av NaOH. I detta avseende förvandlar pH-indikatorn (bromotymolblått) mediets färg från grön till blå när pH är lika med eller större än 7,6. Blå kan vara ljus eller intensiv (preussisk blå).
Slutligen bibehåller natriumklorid mediet osmolaritet och vatten är utspädningsmedlet för alla komponenter..
Samma färgbuljong (grön) - Negativt test
Gul buljong: negativt test
Ljus eller djupblå buljong: testa positivt
Det finns en variant som kallas fenylalaninmalonatbuljong, även kallad Shaw och Clarke's medium. I det här fallet kan två tester analyseras, användning av malonat som kolkälla och produktion av pyruvsyra från fenylalanin..
Antalet gram som anges av insatsen från det valda kommersiella företaget vägs (det kan variera från ett till ett annat). De vägda gramen suspenderas i en liter destillerat vatten. Värm något tills det är helt upplöst. Fördela 3 ml av mediet i 13/100 provrör med bomullslock..
Sterilisera i autoklav vid 121 ° C i 15 till 20 minuter.
Kyl innan du använder den. Om de inte kommer att användas omedelbart, förvara dem i kylskåpet tills de används. Ta buljongen till rumstemperatur innan den ympas.
Mediets pH bör vara 6,7 ± 0,2. Färgen på det beredda mediet är flaskgrönt.
Väg upp 11 g av det torkade mediet och lös upp det i 1 liter destillerat vatten. Resten av beredningen är densamma som tidigare beskrivits.
Det kan också framställas genom att tillsätta 2 g / L fenylalanin till malonatbuljongmediet innan det steriliseras..
Den används som en del av batteriet av biokemiska tester som är sammansatta för identifiering av bakterier i Enterobacteriaceae-familjen.
Hjälper till att skilja mellan:
-Släktet Klebsiella och Enterobacter (+) av släktet Escherichia och Serratia (-).
-Arten av Salmonella enterica ssp arizonae, Salmonella enterica ssp salami och Salmonella enterica ssp diarizonae (+), av arten Salmonella enterica ssp enterica (-).
-Av släktet Klebsiella vanligtvis (+) av släktet Actinobacillus (-).
-Ibland kan det hjälpa till att skilja på släkt och arter av bakterier som inte tillhör Enterobacteriaceae-familjen, till exempel bland icke-jäsande gramnegativa stavar. Alcaligenes faecalis (+) och Acinetobacter sp (-).
Under en tändare tas en del av en ren köln med ett korrekt steriliserat och kyldt platinahandtag. Det tagna provet (lätt ymp) löses i malonatbuljongen. Inkubera med locket löst i aerobios vid 35 ° C ± 0,2 under 24 till 48 timmar.
Malonatbuljong kan också inokuleras från en 18-24 timmars odling i tryptikassoja. I detta fall tas 0,01 ml med en steril pipett och malonatbuljongen ympas. Inkubera med locket löst i aerobios vid 35 ° C ± 0,2 under 24 till 48 timmar.
I slutet av tiden tolkas resultaten. Alla spår av blå färg efter 48 timmars inkubation bör betraktas som positiva. Testet bör inte tolkas som negativt förrän inkubationstiden på 48 timmar har gått..
I fallet med användning av fenylalaninmalonatbuljongvarianten tolkas malonatet först och därefter tillsättes 5 droppar 1 N HCl och 3-5 droppar 8% järnklorid. En mörkgrön färg tolkas som ett positivt test för fenylalanin. Om mediet tvärtom blir ljusblått är testet negativt för fenylalanin..
För att utföra sterilitetskontroll av mediet bör en eller två buljonger inkuberas vid 35 ° C ± 0,2 under 24 timmars inkubation. Efter denna tid bör det inte förekomma grumlighet eller färgförändring.
Kända eller certifierade stammar kan användas för kvalitetskontroll, såsom: Enterobacter aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 33945, Salmonella enterica ssp arizonae ATCC 13314 och Escherichia coli ATCC 25922.
De förväntade resultaten är:
Använd inte buljong som visar grumlighet, fällningar, färgförändringar eller några tecken på försämring.
Ingen har kommenterat den här artikeln än.