De Simmons Citrate Agar Det är ett fast medium som används som ett biokemiskt test för identifiering av mikroorganismer, särskilt gramnegativa baciller. Originalmediet skapades av Koser 1923.
Kosers citratmedium bestod av en buljong innehållande natriumfosfat, ammoniumfosfat, monokaliumfosfat, magnesiumsulfat och natriumcitrat..
Som man kan se är den enda källan till kol i mediet citrat, och kväve är ammoniumfosfat, med utelämnande av proteiner och kolhydrater som en källa till dessa element, de är vanligtvis närvarande i andra medier..
Därför kan bakterierna som inokuleras i detta medium bara reproducera om de kan ta upp kolet från citrat. Testet var positivt om det var grumlighet i mediet, men det hade nackdelen att icke-specifik grumlighet kunde uppstå.
Detta problem löstes av Simmons genom att tillsätta bromotymolblått och agar till Kosers ursprungliga formel. Även om principen är densamma tolkas den annorlunda.
Artikelindex
Vissa bakterier har förmågan att överleva i frånvaro av jäsning eller mjölksyraproduktion, och behöver erhålla energi genom användning av andra substrat. I detta test är den enda kolkällan som erbjuds citrat.
Bakterier som kan överleva under dessa förhållanden metaboliserar snabbt citrat i en alternativ väg till den traditionella, med användning av trikarboxylsyracykeln eller citratfermenteringscykeln..
Katabolismen av citrat av bakterier involverar en enzymatisk mekanism utan koenzym A. Detta enzym är känt under namnet citricas (citrate oxaloacetate lyase) eller citrate desmolase. Reaktionen kräver närvaro av en tvåvärd katjon, som i så fall levereras av magnesium.
Reaktionen genererar oxaloacetat och pyruvat, som sedan ger upphov till organiska syror mitt i ett alkaliskt pH bildat genom användning av kvävekällan. Dessa organiska syror används som en kolkälla som alstrar karbonater och bikarbonater, vilket ytterligare alkaliserar miljön..
Simmons citratmedium bör ympas lätt i fiskstjärt med en rak slinga eller nål och inkuberas i 24 timmar vid 35-37 ° C. Efter tiden observeras resultaten.
Såddningen sker endast på ytan av agaren. Punktera inte.
Om mediet förblir originalfärgen (grön) och det inte finns någon synlig tillväxt, är testet negativt, men om mediet blir blått indikerar det närvaron av alkaliska produkter, som detekteras av pH-indikatorn. I detta fall är testet positivt.
Detta händer för att om bakterien använder kolet från citratet, kan det också ta kvävet från ammoniumfosfatet med vilket det frigör ammoniak och alkalisera mediet..
Å andra sidan, om bakterietillväxt observeras i mediet, men det inte sker någon färgförändring, måste testet också betraktas som positivt, eftersom om det finns tillväxt betyder det att bakterierna kunde använda citrat som kolkälla , även om det inte finns någon förändring i pH just nu (ibland kan det ta tid).
Om det råder något tvivel om tolkningen av den slutliga färgen kan den jämföras med ett oinokulerat citratrör.
Väg 24,2 g av det uttorkade mediet för en liter vatten. Blanda och låt den vila i cirka 5 minuter. Avsluta upplösningen av mediet genom att värma i en eller två minuter, skaka ofta.
Häll 4 ml i provrören och autoklav vid 121 ° C i 15 minuter. När du lämnar autoklaven lutar du med hjälp av ett stöd på ett sådant sätt att agaren stelnar i form av en flöjtnäbb med lite block eller botten och mer fasning.
Det slutliga pH-värdet för citratmediet är 6,9 (grön färg). Detta medium är mycket känsligt för förändringar i pH.
Vid pH 6 eller lägre blir mediet gult. Denna färg observeras inte i testet med bakterier.
Och vid pH 7,6 eller högre ändras mediet till en djup preussisk blå färg..
Simmons Citrate Agar används för identifiering av vissa mikroorganismer, särskilt bacillerna som tillhör Enterobacteriaceae-familjen och andra icke-glukosjäsande baciller..
Simmons citratmedium är ett mycket känsligt test, eftersom falska positiva resultat kan uppnås om vissa misstag görs..
Den försiktighet som måste vidtas är följande:
En mycket tjock eller laddad bakterieympning bör inte göras, eftersom det kan orsaka en koppargul färg att utvecklas på planteringsplatsen, utan att påverka resten av mediet, men det kan leda till att det finns tillväxt. Det betyder inte testpositivitet.
På samma sätt kan en tjock ympning generera falskt positivt, eftersom förformade organiska föreningar inom cellväggarna hos döende bakterier kan frigöra tillräckligt med kol och kväve för att vända pH-indikatorn..
Därför är idealet att så med nålen istället för platinahandtaget för att undvika att ta överflödigt material.
Å andra sidan, när batteriet av biokemiska tester sås för identifiering av mikroorganismen i fråga, är det viktigt att citrattestet är det första som ympas för att undvika överföring av proteiner eller kolhydrater från ett annat medium. ..
Under denna omständighet är det möjligt att få ett falskt positivt, eftersom något av dessa ämnen som införs av misstag kommer att metaboliseras och orsaka en förändring i pH..
Ett annat sätt att undvika överföring av ämnen är att bränna öglan väl och ta en ny ympning mellan ett test och ett annat..
Försiktighet måste också iakttas vid beröring av kolonin för att utföra inokulatet, eftersom det bör undvikas att dra en del av agaren från kulturen från vilken bakterierna kommer, på grund av det ovan förklarade.
I denna bemärkelse rekommenderar Matsen, Sherris och Branson att späda inokulatet i fysiologisk lösning innan citrattestet ympas för att undvika överföring av andra kolkällor.
Det bör tas med i beräkningen att intensiteten hos färgen som produceras när testet är positivt kan variera beroende på handelshuset.
Dessutom finns det mikroorganismer som testar positivt efter 24 timmar, men det finns andra stammar som kräver 48 timmar eller mer för att producera en pH-förändring..
Ingen har kommenterat den här artikeln än.