De Czapek agar (CZA) är ett selektivt fast odlingsmedium speciellt utformat för odling av saprofytiska bakterier och svampar. Det skapades av botanikern Friedrich Johann Franz Czapek, av polskt ursprung, och den amerikanska kemisten Arthur Wayland Dox; Av denna anledning är denna agar också känd som Czapek-Dox-medium..
Det ursprungliga mediet var flytande, men agar tillsattes senare för att göra det till ett fast medium. Czapek-medium består av natriumnitrat, bifaliumfosfat, magnesiumsulfat, kaliumklorid, järnsulfat, sackaros, agar och destillerat vatten..
PH för Czapek-agar är 7,3, men det finns en variant till vilken 10% mjölksyra tillsätts, vars pH förblir vid 3,5. Detta sura medium används för odling av acidofila mikroorganismer.
Å andra sidan modifierade vissa kommersiella hus sammansättningen av Czapek-agar genom att ändra magnesiumsulfat och bifaliumfosfat med glycerofosfat; denna modifiering förhindrar bildningen av magnesiumfosfatutfällningen observerad med den konventionella formeln. På samma sätt finns det en annan variant som jästextrakt tillsätts.
Slutligen rekommenderas Czapek agar av American Public Health Association APHA för studier av Actinomycetes sp, Aspergillus sp, Paecilomyces sp Y Penicillium sp. Dessa arter kännetecknas av att vara miljömikroorganismer och opportunistiska patogener..
Artikelindex
Detta medium innehåller sackaros; Detta kolhydrat fungerar som en källa till kol, medan natriumnitrat är källan till kväve, men till skillnad från andra medier är det tillförda kvävet oorganiskt..
Av denna anledning anses Czapek-mediet vara selektivt, eftersom endast mikroorganismer som kan använda oorganiska föreningar som enda kvävekälla kan växa..
Som en regulator för mediumets osmolaritet är bipaliumfosfat. För sin del ger magnesiumsulfat, kaliumklorid och järnsulfat viktiga mineraler för tillväxt av saprofytiska (fritt levande) mikroorganismer. Med denna formel bildas en fällning av magnesiumfosfat.
Slutligen är agar-agar den förening som ger den fasta konsistensen till mediet och vatten är lösningsmedlet för alla komponenter..
Med den modifierade Czapek-agarformeln förekommer ingen fällning och det förbättrar tillväxtprestandan hos vissa svampar.
Den extrema surheten hos syra Czapek Agar gör det till ett mer selektivt medium, vilket endast tillåter tillväxt av acidofila mikroorganismer som kan använda oorganiskt kväve. Medan Czapek-jästagar förbättrar prestandan hos vissa svampar.
Väg 49 g av det uttorkade odlingsmediet och lös upp i destillerat vatten. Applicera värme tills det kokar. Skaka blandningen ofta tills den är helt upplöst..
Fördela den upplösta blandningen i rör och autoklav vid 121 ° C i 15 minuter. När du tar bort från autoklaven, homogeniseras innan du lägger rören och låt dem stelna.
Autoklaver den upplösta blandningen vid 121 ° C i 15 minuter och låt den svalna till 50 ° C, homogenisera och häll 20 ml i sterila petriskålar. Låt stelna, vänd och förvara i kylen tills den används.
PH bör vara 7,3 ± 0,2. Färgen på det uttorkade mediet är vitt och det beredda mediet är ljust bärnstensfärgat, lätt grumligt på grund av närvaron av en flockande fällning..
Förbered som redan beskrivits, men tillsätt 10 ml steril 10% mjölksyra för varje beredd liter medium. Det modifierade Czapek-mediet måste förbli vid pH 3,5 ± 0,2.
Väg upp 45,4 g av det uttorkade mediet och lös upp i 1 liter vatten. Resten av beredningen är densamma som beskrivits ovan. Färgen på det uttorkade mediet är vit och det beredda mediet är vitaktigt. Det slutliga pH-värdet för mediet är 6,8 ± 0,2.
Kallas också Czapek Yeast Extract Agar (CYA). Innehåller elementen i klassisk Czapek-agar plus jästextrakt.
Czapek-mediet används för att söka efter saprofytiska mikroorganismer i bland annat jord, grönsaker, korn, luft, insekter..
Czapek-agar vid surt pH används för tillväxt av acidofila mikroorganismer, medan modifierad Czapek-agar är särskilt användbar för bildandet av klamydosporer hos arter av komplexet. Candida albicans.
Slutligen är Czapek-jästagar mycket användbar för isolering av Aspergillus och Penicillium..
För att söka efter Actinomycetes i jorden, gör så här: provet behandlas med fenoliserat vatten i 30 minuter och sedan sås 1 ml av suspensionen på Czapek-agar. Inkubera vid 28 ° C i 5 till 7 dagar.
För grönsaker, spannmål och insektsprover placeras de direkt på agaren. Du kan också göra utspädningar och så 0,1 ml på agarytan..
För sådd används en rak slinga eller nål, den impregneras med pinnen och agaren ympas genom att göra en punktering tills den rör vid plattans botten. Inkubera i 24 timmar vid 28 ° C och undersök under ett mikroskop ovanför och under plattan för att se om klamydosporer har bildats..
Inkubationstemperaturen och tiden varierar beroende på vilken typ av mikroorganism som ska isoleras. Plattorna inkuberas vanligtvis under en till två veckor i ett temperaturintervall av 20 till 25 ° C..
Det finns dock specifika förhållanden för vissa stammar. Till exempel har de flesta arter av släktet Aspergillus optimal tillväxt vid 30 ° C; i alla fall A. fumigatus växer vid 50 ° C.
Beträffande inkubationstiden är dock en eller två veckor normal Candida albicans kan utvecklas inom 24 till 48 timmar vid 25 ° C.
Det utvecklas under 12 dagars inkubation vid 27 ° C. Deras kolonier är små (25 mm).
Kolonierna har ett sammetslen utseende, med en definierad vit kant och i mitten har den en blågrön nyans som blir grå när den åldras. Baksidan av kolonin är orange och placerar mitten av samma färg på grund av produktionen av pigment.
Utvecklas med vitt till gult mycel och svarta sporer.
Krämiga ljusbeige kolonier utvecklas. I modifierad Czapek bildar agar klamydosporer.
Ett mörkgrönt mycel utvecklas på sju dagar vid 25 ° C.
För att utvärdera odlingsmediets kvalitet kan certifierade kontrollstammar sås, såsom: Aspergillus niger MKTA 16404, Candida albicans MKTA 10231.
Aspergillus niger utvecklar vitt till gult mycel och svarta sporer på cirka 5 dagar, medan Candida albicans den kommer att ha en tillfredsställande tillväxt under 24 timmars inkubation vid 25 ° C; kolonierna är gräddfärgade.
Vissa studier har visat att för återvinning av Actinomycetes är agar med bäst avkastning potatisdextrosagar, med Czapek-agar som andra, men för återvinning av Aspergillus och Penicillium är Czapek-agar den som ger den högsta återvinningsgraden..
Ingen har kommenterat den här artikeln än.