Hektoen agar foundation, beredning och användning

1348
Simon Doyle
Hektoen agar foundation, beredning och användning

De Hektoen agar eller enterisk Hektoen-agar är ett fast, selektivt och differentierat odlingsmedium. Det skapades vid Hektoen-institutet av King och Metzger för isolering av enteropatogena bakterier av släktena Shigella och Salmonella..

Mediet består av proteospepton, jästextrakt, gallsalter, laktos, sackaros, salicin, natriumtiosulfat, natriumklorid, järncitrat, ammoniumcitrat, bromotymolblått, surt fuchsin och agar. Denna formulering gör det möjligt att skilja Shigella- och Salmonella-släkten från resten av de bakterier som kan växa i detta medium..

A. Virgin Hektoen agar B. Seeded Hektoen agar. Källa: Flickr.com/Den ursprungliga uppladdaren var Philippinjl på franska Wikipedia. [CC BY-SA 2.0 fr (https://creativecommons.org/licenses/by-sa/2.0/fr/deed.en)]

Även om det finns andra medier med samma funktion som Hektoen agar, har det en större fördel jämfört med andra medier, speciellt när du vill återställa Shigella-arter..

Arten av båda könen producerar allvarliga gastrointestinala problem hos människor på grund av konsumtion av förorenad mat; därför är överföring fekal - oral. Det är därför användningen av Hektoen agar indikeras främst i mikrobiologisk analys av avföring och matprover..

Artikelindex

  • 1 Motivering
  • 2 Förberedelse
  • 3 Använd
  • 4 Kvalitetskontroll
  • 5 Begränsningar
  • 6 Referenser

Grund

Hektoen agar innehåller peptoner och jästextrakt som en källa till näringsämnen, vilket ger de väsentliga elementen för mikrobiell utveckling.

Det har emellertid också gallsalter som verkar genom att hämma tillväxten av vissa bakterier, särskilt gram-positiva och vissa gram-negativa. Det är av denna anledning som det anses vara ett selektivt medium.

Å andra sidan är Hektoen agar ett differentiellt medium. Denna egenskap ges av närvaron av fermenterbara kolhydrater såsom laktos, sackaros och salicin, tillsammans med pH-indikatorsystemet, representerat av bromotymolblått och surt fuchsin..

Alla bakterier som kan växa på detta medium som inte tillhör släktet Salmonella och Shigella kommer att utveckla lax- eller apelsinkolonier med undantag för släktet Proteus. Detta beror på jäsning av en eller flera av de närvarande kolhydraterna, vilket gör mediet surt, vilket gör att pH-indikatorn ändras..

För sin del kan inte släktet Shigella och Salmonella jäsa några av de närvarande kolhydraterna, med endast peptoner som en energikälla, som alkaliserar mediet och därför är deras kolonier blågröna.

Bakterier som kan bilda vätesulfid (färglös gas) kan också urskiljas i detta medium. Natriumtiosulfat fungerar som svavelkälla medan järncitrat är utvecklingsmedlet. Båda föreningarna möjliggör bildandet av en svart fällning av järnsulfid som visar reaktionen.

Den svarta fällningen i mitten av kolonin med en transparent gloria runt ger ett fisköga utseende. Denna egenskap antyder närvaron av släktet Salmonella.

Slutligen bibehåller natriumkloriden den osmotiska balansen och agaren ger mediet fast konsistens..

Förberedelse

Väg 76 g av det uttorkade mediet och lös upp det i en liter destillerat vatten. Skaka blandningen kraftigt och låt den vila i 10 till 15 minuter. Den kan värmas upp och kokas, vilket ger roterande rörelser tills den upplöses totalt. Detta medium autoklaveras inte.

När mediet når en temperatur på cirka 45 ° C, häll en volym på 20 ml direkt i sterila petriskålar..

Agaren får stelna. Vid den tiden är de redo att användas. Vi rekommenderar att du använder dem omedelbart. Om detta inte är möjligt förvaras de i kylen tills de används..

Tallrikarna bör tas ut från kylskåpet i förväg innan sådd för att få dem till rumstemperatur.

Mediets pH bör vara 7,5 ± 0,2. Färgen på det uttorkade mediet är lila och det beredda mediet är brungrönt.

Använda sig av

Användning av Hektoen agar rekommenderas för att söka efter bakterier av släktet Shigella och Salmonella i avföring och matprover..

Möjligheten att isolera dessa bakterier ökas avsevärt om provet tidigare har berikats i speciella buljonger, såsom selenitbuljong, cystinselenitbuljong, tetrationjonbuljong etc..

Inokulatet måste vara starkt och såningen sker genom strimmor. Plattorna inkuberades vid 37 ° C under 24 till 48 timmar i aerobios.

Inkubation i 48 timmar rekommenderas eftersom koloniens egenskaper är tydligare för deras tolkning och differentiering vid denna tidpunkt..

QA

För att utföra kvalitetskontroll på detta medium används certifierade bakteriestammar, såsom: Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Shigella flexneri ATCC 12022 och Shigella sonnei ATCC 25931.

De förväntade resultaten är som följer: Salmonella typhimurium och  Salmonella enteritidis de bör utveckla blågröna kolonier med eller utan ett svart centrum. Medan Shigella-arterna kommer att växa som grönblå kolonier.

Stammar av Escherichia coli ATCC 29212, Proteus mirabilis, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Enterococcus faecalis ATCC 29212 och Staphylococcus aureus ATCC 25923.

I dessa fall är de observerade egenskaperna följande: E coli Y K. pneumoniae kolonier kommer att utvecklas i denna medium laxfärg till orange, med en fällning av samma färg runt. Proteus kommer att utveckla blågröna kolonier med eller utan ett svart centrum..

Medan S. aureus Y  E. faecalis måste hämmas ibland E. faecalis lyckas växa som mycket små, gula kolonier.

Å andra sidan, eftersom detta medium inte autoklaveras, är det viktigt att utvärdera steriliteten hos mediet. Därför bör en till två oinokulerade plattor från varje beredd sats inkuberas vid 37 ° C under 24 timmar i aerobios..

Uppenbarligen förväntas ingen tillväxt av något slag på plattan.

Begränsningar

-Proteusarter kan utvecklas i detta medium och egenskaperna hos deras kolonier kan förväxlas med Salmonella- eller Shigella-arter. Av denna anledning måste alla misstänkta kolonier bekräftas med biokemiska tester..

-Det är nödvändigt att åtfölja användningen av detta medium med andra mindre selektiva agar, för om den efterfrågade mikroorganismen finns i låga koncentrationer kanske den inte utvecklas i detta medium..

-Överhett inte under beredningen, eftersom överdriven värme förändrar mediets sammansättning.

-Laktosjäsande salmonellakolonier kan se ovanligt ut och kan gå obemärkt förbi.

Referenser

  1. Wikipedia-bidragsgivare. Hektoen enterisk agar. Wikipedia, den fria encyklopedin. 13 mars 2019, 23:38 UTC. Tillgänglig på: .wikipedia.org / Åtkomst till 16 mars 2019.
  2. BD Laboratories. BD Hektoen Enteric Agar (HE Agar). 2013. Tillgänglig på: bd.com
  3. Britannia Laboratories. Hektoen Enteric Agar. 2015.Tillgängligt på: britanialab.com
  4. Difco Francisco Soria Melguizo Laboratories. Hektoen agar. Finns på: f-soria.es
  5. Difco & BBL Manual, Hektoen Enteric Agar. 2: a upplagan. Finns på: bd.com/europe

Ingen har kommenterat den här artikeln än.