De potatisdextrosagar Det är ett fast, icke-selektivt näringsmedelsodlingsmedium. Bakterie- och svamparter kan växa i den, men dess användning är särskilt indicerad för isolering av trådformiga svampar och jäst. Det är också känt som PDA-medium för det engelska uttrycket Potato Dextrose Agar.
Det är särskilt användbart för isolering av fytopatogena svampar, det vill säga de som påverkar växter. För att så proverna från infekterade grönsaker kan andra medel såsom Sabouraud-agar eller malta-agar användas, men för rutinmässig användning föredras potatisdextrosagar på grund av att man får större sporulering..
Det används också för att räkna svampkolonier i prover av kosmetika, farmaceutiska produkter och vissa mejeriprodukter. På samma sätt är det lämpligt för såddprover av hudskrapningar på jakt efter dermatofyter, som växer mycket bra i detta medium och utvecklar deras karakteristiska pigment..
Potatisdextrosmedium är ett mycket enkelt och enkelt medium att förbereda i laboratoriet. Innehåller, som namnet antyder, infusion av potatis, dextros och agar-agar. Dessutom kan hämmande substanser tillsättas för att förhindra bakterietillväxt och öka selektiviteten för svamparter..
Artikelindex
Potatisdextrosagar är ett odlingsmedium som ger de näringsämnen som är nödvändiga för utvecklingen av trådsvampar och jäst..
Kombinationen av infusion av potatis med glukos ger den perfekta energikällan för en tillfredsställande tillväxt av svampar. Medan agaren är den som ger mediet konsistens.
Mediet i sig hämmar inte bakterietillväxt, därför är det ett icke-selektivt medium. För att göra det selektivt behöver det tillsättas hämmande ämnen som vinsyra eller antibiotika..
Den bereds enligt följande:
Först och främst tvättas potatisarna mycket bra, vilket tar bort jorden de besitter. De skärs i tunna skivor med allt och skal. 200 g potatis vägs och kokas i en liter destillerat vatten i en halvtimme.
I slutet av tiden, filtrera eller sila hela beredningen genom en ostduk.
Den erhållna vätskan kompletteras med destillerat vatten upp till en liter. Tillsätt 20 g agar-agar och 20 g dextros till infusionen, blanda väl och autoklav vid 121 ° C, vid 15 pund tryck i 15 minuter..
Låt svalna till 50 ° C och servera i sterila petriskålar. De beredda tallrikarna förvaras i kylskåp..
Potatisdextros-agarkilar kan också beredas..
I detta fall, innan sterilisering i autoklaven, placeras 12 till 15 ml av mediet i rör, senare autoklaveras de och när de lämnas ligger de på speciella stöd tills det stelnar. Förvaras i kylskåp.
Mediet förblir vid ett pH av 5,6 ± 0,2, men vissa laboratorier tillsätter 10% vinsyra för att sänka pH till 3,1 ± 0,1 för att hämma bakterietillväxt..
I samma mening föredrar andra laboratorier att tillsätta antibiotika för att göra det selektivt för odling av svampar och förhindra bakteriell utveckling..
Väg upp 39 g av det kommersiellt tillgängliga dehydratiserade mediet och lös upp i en liter destillerat vatten. Låt stå i 5 minuter.
Blandningen upphettas under frekvent omrörning tills den är helt upplöst. Därefter steriliseras den i en autoklav vid 121 ° C i 15 minuter..
Tallrikar eller kilar kan beredas. Fortsätt enligt beskrivningen ovan.
PH är 5,6 ± 0,2. Om pH 3,1 önskas, ska 14 ml steril 20% vinsyra tillsättas innan de serveras på plattorna..
Råmediet är beige och det beredda mediet är ljust bärnstensfärgat med ett lätt grumligt eller opaliserande utseende..
Bladen skärs i bitar.
I ett 50 cc glas med 50% alkohol, placera lövbitarna (färgade och friska bitar) för att desinficera ytan i 20 till 30 sekunder. Kasta alkoholen och tillsätt 20% natriumhypoklorit i 40 till 50 sekunder om de är tunna löv och öka tiden till 80 sekunder om det är bark och stockar.
Kasta natriumhypoklorit och ta de desinficerade bitarna med en steril pincett och placera dem på ytan av mediet (högst 10 stycken). Datum och inkubera vid 20-30 ° C.
Om frukten är köttig, öppna den frukt som drabbats av svampen och ta bitar med en steril skalpell, både från de sjuka och friska delarna och placera dem på ytan av agaren.
Om frukten är citrus, som en citron eller en apelsin, måste den öppnas och dess frön sås.
När fruktens yta påverkas och sporer observeras är idealet att använda gallermetoden på tallriken; Detta består i att röra vid sporerna med en steriliserad och kyld "L" -formad spatel, och sedan göra en sicksack sådd 2 till 3 gånger på agaren.
De desinficeras enligt beskrivningen i bladen och placeras senare på agaren.
En skrapning av barken görs och senare bitar av den friska och sjuka delen tas och sås direkt på agaren.
De ympade plattorna inkuberas aerobt vid 20-30 ° C i 72 timmar.
Provtagningen bör göras med hjälp av en skalpellblad nr 11, antingen för att klippa drabbat hår, hudfjäll eller naglar på jakt efter dermatofyter. Innan provet tas måste området desinficeras med 70% alkohol..
Vid fjällande skador bör skadorna skrapas, eftersom det är mer troligt att svampen finns där.
I exudativa lesioner tas provet med en torr eller våt vattpinne. Så omedelbart på potatisdextrosagar eller Sabouraudagar. Undvik transportmedel.
En annan metod för provtagning är genom Mariat och Adan Campos matta kvadrat teknik. I det här fallet gnuggas det drabbade området 5 gånger med en bit steril ull för senare odling..
Provet kan placeras direkt i odlingsmediet.
Beroende på patologin kan den drabbade delen avskäras eller dras upp ur roten. Placera provet i odlingsmediet.
En specifik del av den drabbade nageln kan skrapas eller klippas. Det beror på vilken typ av skada.
Skär provet i 1 mm bitar innan sådd för att öka sannolikheten för svampens kontakt med odlingsmediet..
Kolonierna erhållna i plattan isoleras i rör som innehåller potatisdextrosagar för att utföra den makroskopiska studien av kolonierna (utseende, färg, konsistens, utvecklingsgrad.
Den mikroskopiska studien (observation av strukturer och deras formationer) kan göras genom mikrokulturer eller direkt observation under mikroskopet mellan lamina och lamella..
Detta medium kan också användas för att bestämma svamp- och jästbelastningen i växt-, livsmedels-, kosmetiska eller läkemedelsprover. För detta ändamål används potatisdextrosagar kompletterat med antibiotika, såsom: (kloramfenikol, klortetracyklin eller båda).
Häll 1 ml av provet - helst utspätt - i en steril och tom petriskål, smält sedan en plugg med potatisdextrosagar och låt svalna till 45 ° C. Häll på petriskålen och rotera tills den är homogeniserad. Låt stå tills det är fast.
Inkubera aerobt vid 20-25 ° C (mögel) eller 30-32 ° C (jäst) i 5 till 7 dagar eller mer, beroende på vilken typ av svamp som söks och typ av prov. Två plattor kan användas för att inkubera i båda temperaturområdena.
Potatisdextrosagar kan användas för att upprätthålla livskraftiga svampstammar i flera år.
För att göra detta odlas svampen i kilar av potatisdextrosagar och när svampen har vuxit täcks den med mineralolja. Oljan bör steriliseras i en autoklav i 45 minuter och ha en viskositet på cirka 300 till 330 Saybolt. Oljan ska vara 1 till 2 cm ovanför spetsens spets.
Från varje beredd sats bör 1 eller 2 plattor tas och inkuberas vid 25 ° C i 48 timmar eller vid 20 ° C i 96 timmar. En bra sterilitetskontroll är en där koloniutveckling inte observeras..
Kända eller certifierade kontrollstammar som:
Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763, Candida albicans ATCC 10231, Aspergillus brasiliensis ATCC 16404, Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533. God tillväxt förväntas i alla fall.
Ingen har kommenterat den här artikeln än.