De vismutsulfitagar är ett fast, selektivt och differentierat odlingsmedium, speciellt formulerat för isolering av Salmonella enterica undergrupp enterica serotyp Typhi, bland andra arter av Salmonella. Mediet är känt som BSA-agar för sin akronym på engelska Bismuth Sulfite Agar..
Den ursprungliga formeln för vismutsulfitagar skapades 1927 av Wilson och Blair (Glucose Bismuth Sulphite Iron Medium); Detta innehöll natriumsulfit, glukos, vismutlösning, ammoniumcitrat, järnsulfat och agar-agar..
Idag finns det en modifiering av det ursprungliga mediet, som består av köttextrakt, kött- och kaseinpeptoner, vismutsulfitindikator, glukos, dinatriumfosfat, järnsulfat, ljusgrön och agar-agar..
Det finns många medel för isolering av Salmonella-arter, men när det gäller att utvinna Typhi-serotypen har vismutsulfitagar en anmärkningsvärd fördel jämfört med dem, eftersom det i de flesta fall erhålls en mycket låg eller ingen återhämtning av denna mikroorganism..
Det är emellertid nödvändigt att använda mer än en typ av medium när man försöker isolera enteropatogener, eftersom vismutsulfitagar är mindre effektivt för andra Salmonella-arter och för Shigella-släktet, som hämmas eller utvecklas mycket dåligt. I denna agar.
Det bör noteras att av alla Salmonella-arter är Typhi-serotypen en av de viktigaste enteropatogenerna hos människor, detta är dess enda reservoar. Denna serovar orsakar tyfus, gastroenterit, bakteriemi och septikemi..
Av denna anledning är det viktigt att inkludera denna agar när man analyserar vatten, avföring eller livsmedelsprover där det finns misstänkt förekomst..
Artikelindex
Liksom de flesta odlingsmedier innehåller Bismuth Sulfite Agar näringsämnen för att främja bakterietillväxt, såsom peptoner och köttextrakt. På samma sätt fungerar glukos som en källa till energi och kol..
Emellertid kommer inte alla bakterier att växa på detta medium, eftersom vismutsulfitagar är ett selektivt medium. Den innehåller föreningar som hämmar tillväxten av grampositiva mikroorganismer och vissa gramnegativa bakterier. Dessa föreningar är: indikatorn vismutsulfit och ljusgrön.
För din del bibehåller dinatriumfosfat mediet osmolaritet och pH.
Dessutom är vismutsulfitagar ett differentiellt medium tack vare närvaron av järnsulfat, som visar bildandet av HtvåS. HtvåS bildad av bakterier reagerar med järnsulfat och bildar en klart synlig olöslig svart fällning.
Slutligen ger agar-agar mediet en solid konsistens..
Väg upp 52,3 g av det uttorkade mediet och lös upp i en liter vatten. Värm blandningen att koka i 1 minut med ofta omrörning tills den är helt upplöst. Överhett inte för mycket. Detta medium autoklaveras inte eftersom extrem värme skadar odlingsmediet..
Låt svalna till 45 ° C och skaka innan det serveras i sterila petriskålar. Det rekommenderas att göra tallrikar med god tjocklek. För detta måste 25 ml hällas i varje platta. Låt stelna. Eftersom det är ett medium som inte är steriliserat, är det normalt att dess omedelbara användning föreslås.
En studie utförd av D'aoust 1977 visade dock att det finns en bättre återhämtning av Salmonella typhimurium Y Salmonella enteritidis eftersom Bismuth Sulfite Agar Medium åldras påverkas inte prestanda för serovar Typhi Y Paratyphi B.
D'aoust rekommenderar att plattorna används dag 4 i kylning, även om han varnar för att medeltiden minskar selektiviteten och utvecklar lättare stammar av Proteus vulgaris.
Av denna anledning är det för starkt kontaminerade prover, såsom avföring, att föredra att använda det nylagade mediet. Använd annars på dag 4 av beredningen. Andra författare rekommenderar att du använder tallrikarna dagen efter beredningen, förvarade i kylskåp..
Kylda plattor måste härdas före användning. Mediets pH bör vara 7,5 ± 0,2. Färgen på råmediet är beige och det beredda mediet är gröngrått opaliserande.
Bland proverna som kan planteras i detta medium är prover av avföring, dricksvatten eller avloppsvatten och mat..
För att förbättra isolaten rekommenderas att man utför en föranrikningsbehandling med laktosbuljong och efter anrikning med tetrationionbuljong eller cystinselenitbuljong innan man sådd på vismutsulfitagar..
Plattorna inkuberas vid 35 ° C ± 0,2 under 24 till 48 timmar i aerobios.
Kolonierna i Salmonella Typhi de ses vanligtvis på denna agar inom 24 timmar med ett svart centrum och omges av en ljusgrön gloria. Medan de på 48 timmar blir helt svarta på grund av bildandet av vätesulfid.
Salmonella Paratyphi A det presenterar kolonier med varierande egenskaper. Efter 18 timmars inkubation kan svarta, gröna eller transparenta kolonier med ett slemhinnigt utseende observeras. Medan de vid 48 timmar är helt svarta och ibland med en uttalad metallisk glans..
S. Paratyphi A tenderar att svarta miljön runt kolonin.
Salmonella sp visa svarta eller gröngrå kolonier, med eller utan metallisk glans, och kan svaga omgivningen eller inte.
Koliforma stammar är i allmänhet helt hämmade, men om de växer utvecklas de som ogenomskinliga gröna eller bruna kolonier utan metallisk glans. Fläck inte mediet runt kolonin.
-Mycket svaga ympningar kan orsaka kolonier av Salmonella Typhi ljusgrön färg, går obemärkt förbi och kulturen rapporteras som negativ.
- Vismutsulfitagar kan hämma återhämtningen av vissa arter av salmonella, såsom S. sendai, S. berta, S. gallinarum, S. abortus-equi.
-Detta medium hämmar de flesta arter av släktet Shigella.
- S. Typhi och S. arizonae kan ge mycket liknande kolonier.
-Koliformer som producerar HtvåS som Proteus och Citrobacter producerar kolonier som liknar de hos Salmonella, därför är det nödvändigt att utföra biokemiska identifieringstester.
-Bra strimmor måste göras för att få isolerade kolonier; det är det enda sättet att observera de typiska egenskaperna hos kolonier av släktet Salmonella.
För sterilitetskontrollen inkuberas en oinokulerad platta vid 37 ° C, det förväntas att det inte finns någon tillväxt eller färgförändring..
För kvalitetskontroll, kända stammar som:
Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella Typhi ATCC 19430, Shigella flexneri ATCC 12022, Enterococcus faecalis ATCC 29212.
Det förväntas att Escherichia coli Y Shigella flexneri hämmas delvis genom att utveckla grönbruna respektive bruna kolonier. Medan båda salmonellerna måste ha en utmärkt utveckling med svarta kolonier med en metallisk glans, och slutligen Enterococcus faecalis måste hämmas helt.
Ingen har kommenterat den här artikeln än.