De XLD agar eller Xylose Lysine Deoxycholate Agar är ett selektivt och differentierat fast odlingsmedium för isolering av enteropatogener. Taylor designade XL-agarformeln (Xylose, Lysine) för att förbättra isoleringen av släktet Shigella.
Han observerade att detta släkt hämmades i de flesta medier avsedda för isolering av enteropatogener. Därefter tillsattes natriumdeoxikolat, natriumtiosulfat och ferriammoniumcitrat för att öka dess selektivitet. Denna formel har visat sig vara användbar för både isolering av Shigella och Salmonella.
XLD-agar består av jästextrakt, natriumdeoxikolat, xylos, lysin, laktos, sackaros, natriumtiosulfat, järnammoniumcitrat, natriumklorid, fenolrött och agar. I de flesta bakteriologilaboratorier används duo XLD-agar och SS-agar för att studera fekalprover för Shigella och Salmonella..
Andra laboratorier föredrar bland annat CHROMagar Salmonella och XLD-agar, bland andra tillgängliga alternativ. Dessa duon kan tillagas i dubbla petriskålar. På ena sidan placerar de XLD-agar och på motsatt sida det andra valda mediet.
Artikelindex
XLD-agar har jästextrakt, som fungerar som en näringskälla för mikroorganismer som utvecklas på denna agar. Dessutom ger närvaron av kolhydrater (xylos, sackaros och laktos) energi till bakterierna som kan jäsa dem.
Som ett hämmande ämne har det natriumdeoxikolat; Detta förhindrar tillväxten av Gram-positiva bakterier, vilket gör mediet selektivt.
Som redan nämnts innehåller XLD-agar xylos; Detta kolhydrat fermenteras av alla bakterier som växer i detta medium förutom släktet Shigella..
Detta är en av egenskaperna som ger den sin differentiella karaktär, eftersom Shigella-kolonierna skiljer sig från resten genom att utveckla röda kolonier, medan de andra bakterierna producerar gula kolonier..
Släktet Salmonella jäser också xylos och genererar initialt gula kolonier. Efter att ha tömt kolhydratxylosen angriper den dock lysin för sitt enzym lysindekarboxylas. Dekarboxylering av lysin genererar alkalier som förvandlar kolonin och det omgivande mediet till det ursprungliga röda.
Detta beteende utförs endast av Salmonella, eftersom koliformerna som dekarboxylerar lysin inte kan alkalisera mediet. Detta beror på att koliformer också fermenterar den närvarande laktos och sackaros; produktionen av syror är därför mycket hög, vilket lämnar den gula kolonin i dessa bakterier.
Det bör noteras att släktet Salmonella inte jäser sackaros eller laktos.
XLD-agar tillåter också detektion av Salmonella-arter som producerar HtvåS; För detta har den svavelkällan representerad av natriumtiosulfat och en reaktionsutvecklare som är järnammoniumcitrat..
Den senare reagerar med HtvåS (färglös gas) och bildar en olöslig synlig svart fällning av järnsulfat. I den meningen kommer egenskaperna hos salmonellakolonierna att vara röda med ett svart centrum..
Det bör noteras att för bildningsreaktionen av HtvåJa, ett alkaliskt pH behövs. Det är därför andra Enterobacteriaceae som bildar HtvåS de kan inte göra det eller de gör det dåligt i detta medium, eftersom den höga syrahalt som de producerar när de jäser de närvarande kolhydraterna hämmar eller hindrar reaktionen.
Slutligen bibehåller natriumklorid osmotisk balans; agar är stelningsmedlet och fenolrött detekterar förändringar i pH, vilket gör kolonin och mediet färg.
Väg ut 55 g uttorkat XLD-medium och lös upp i 1 liter vatten. Värm upp och rör om blandningen tills den når kokpunkten. Överhett inte, eftersom värmen skadar mediet och skapar en fällning som förändrar morfologin hos typiska kolonier.
Detta medium får inte autoklaveras. Vid upplösning måste den överföras till ett vattenbad vid 50 ° C. Vid kylning ska den serveras direkt på sterila petriskålar. De kan hällas i enkla eller dubbla tallrikar. De får stelna och förvaras i kylen tills de används..
Temperera före användning. Eftersom det är ett icke-sterilt medium rekommenderas det att förbereda det nära dagen för dess användning..
Mediets slutliga pH bör vara 7,4 ± 0,2. Färgen på det beredda mediet är orange-rött, genomskinligt utan fällning..
Om du har Xylose Lysin (XL) basagar kan du tillsätta natriumdeoxikolat, natriumtiosulfat och järnammoniumcitrat. På detta sätt erhålls XLD-agarformeln.
XLD-agar används för återvinning av enteropatogener, främst av släktet Shigella och sekundärt av släktet Salmonella. Det är användbart för utvärdering av avföring, vatten och matprover.
Pallprover kan sås direkt på XLD-agar, vilket ger en bra fördelning av materialet för att erhålla isolerade kolonier.
För att förbättra Salmonella-återhämtningen kan XLD-agar sås från Salmonella-anrikningsmedier..
När det gäller mat kan anrikningsbuljonger för Salmonella och Shigella användas. För Salmonella kan du använda selenit cystinbuljong, ljusgrön tetrationjonbuljong, bland andra..
När det gäller Shigella kan den berikas med Shigella-buljong med 0,5 µ / ml novobiocin, inkuberat vid 42 ° ± 1 ° C i 16-20 timmar.
I vattenanalys rekommenderas bland annat membranfiltreringsteknik och användning av XLD-agar..
Det ympade mediet inkuberas aerobt vid 35 ° C under 24 till 48 timmar..
De typiska kolonierna i varje släkte observeras, de misstänkta kolonierna bör genomgå biokemiska tester för identifiering.
Följande bakteriestammar kan användas för att utvärdera kvalitetskontrollen av mediet: Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella abony DSM 4224, Shigella flexneri ATCC 12022, Shigella sonnei ATCC 25931, Escherichia coli ATCC 25922, Proteus mirabilis ATCC 43071, Klebsiella pneumoniae ATCC 33495.
Släktet Salmonella kännetecknas av att i detta medium presenterar röda kolonier ett svart centrum eller helt svarta kolonier. I släktet Shigella måste kolonierna vara röda, det vill säga mediumets färg.
I fallet med Escherichia coli det förväntas helt eller delvis hämmas; om den växer är kolonierna gula. För att Proteus mirabilis dålig tillväxt förväntas med rosa kolonier med eller utan svart centrum. Så småningom kommer släktet Klebsiella att växa som gula kolonier.
XLD-agar används ofta i bakteriologilaboratorier på grund av dess höga effektivitet för återvinning av Shigella och har också en god återhämtning av Salmonella-släktet.
Rall et al. (2005) i sitt arbete med titeln "Utvärdering av tre anrikningsbuljonger och fem fasta medier för detektion av Salmonella i fjäderfä" visade att av de 3 klassiska medier som testades (ljusgrön agar, SS-agar och XLD-agar), XLD agar hade den bästa återhämtningsgraden.
Återvinningsprocenten var som följer: 13,8% för ljusgrön agar, 27,6% för SS och 34,5% för XLD. Det överträffades endast av det kromogena mediet Rambach-agar med 48% återhämtning och CHROMagar med 79,3%.
Ingen har kommenterat den här artikeln än.