De laktosbuljong är ett flytande, icke-selektivt odlingsmedium, som huvudsakligen används som ett förberikningsmedium vid isolering av Salmonella-stammar från den mikrobiologiska analysen som utförts på bearbetade livsmedel, mejeriprodukter eller vatten. Detta rekommenderas av Internationella kommissionen för mikrobiologiska specifikationer för livsmedel (ICMPF).
Mediet innehåller enzymatisk nedbrytning av gelatin, köttextrakt och laktos, ämnen som är nödvändiga för bakterietillväxt. Dessutom är laktos ett fermenterbart kolhydrat, därför kan vissa koliformer bryta ner det med produktion av gas..
Av denna anledning rekommenderas laktosbuljong av American Public Health Association (APHA) för den presumtiva studien av totala och fekala koliforma bakterier, vilket kvalificerar det som ett utmärkt alternativ för att ersätta tryptoslaurylsulfatbuljong i standardtekniken för det mest sannolika antalet ( MPN).), Används för mikrobiologisk analys av mat, mjölk och yt-, underjordiska, fritids-, hushålls- och industriella avloppsprover.
Artikelindex
För mikrobiologisk analys av vissa prover är föranrikningssteget viktigt för att kunna återvinna en specifik mikroorganism som kan vara i mycket låg kvantitet eller i ogynnsamma förhållanden som bryter mot eller minimerar dess livskraft..
Så är fallet med torkade och bearbetade livsmedel, eventuellt förorenade med Salmonellas sp. I dessa fall, om bakterierna är närvarande, har de utsatts för fysiskt och kemiskt missbruk under produktens produktionsprocess..
På ett sådant sätt att mikroorganismer utsätts för ogynnsamma faktorer såsom uttorkning, exponering för hämmande eller toxiska produkter och överlappningen som genereras av närvaron av andra bakterier i större kvantitet, bland andra..
I denna mening har laktosbuljongen en reparerande effekt på de skadade strukturerna i mikroorganismen, vilket får den att återhämta sig och reproducera, på ett sådant sätt att det kan detekteras.
På samma sätt har laktosbuljongen förmågan att späda ut de hämmande substanserna som kan påverka dess livskraft, vilket möjliggör dess utveckling. Dessutom är laktosbuljongens näringssammansättning strategisk för att gynna tillväxten av Salmonella sp ovanför andra mikroorganismer.
För slutgiltig identifiering, subkultur till andra slutliga kulturmedier.
Å andra sidan tillåter sammansättningen av mediet också detektering av laktosjäsande mikroorganismer som producerar gas..
För att bereda en liter laktosbuljong måste 13 gram av det uttorkade mediet vägas och lösas i 1000 ml destillerat vatten..
För att hjälpa till att lösa mediet i vattnet kan lösningen värmas upp lite, men inte för mycket..
En gång homogen bereds lösningen enligt följande: om buljongen kommer att användas för att söka efter koliformer, bereds ett rack med provrör, i vilket ett Durham-fermenteringsrör sätts upp och ned.
Durham-röret är en mycket viktig detalj, eftersom det gör det möjligt att detektera gasbildning, en data av stort värde i sökandet efter koliforma ämnen.
När rören är klara fördelas 10 ml av mjölkbuljongen i dem, en mängd som måste vara tillräcklig för att täcka hela Durham-röret..
Om laktosbuljongen ska användas som en förberikningsbuljong är det inte nödvändigt att placera ett Durham-fermenteringsrör. I det här fallet krävs en större mängd medium (225 ml), som serveras i 500 ml flaskor, bred mun och med ett värmebeständigt skruvlock..
Därefter autoklaveras rören eller kolvarna vid 121 ° C i 15 minuter..
Mediet måste förbli vid ett slutligt pH på 6,9 ± 0,2 vid 25 ° C.
Buljongen lagras i kylen tills den används.
Före användning måste buljongen bringas till rumstemperatur.
Å andra sidan kan laktosbuljongen också framställas i en dubbel koncentration..
Vissa laboratorier lägger till bromokresollila till laktosbuljongen som en pH-indikator för att visa rören där det har förekommit laktosjäsning på grund av färgförändringen. I detta fall tar buljongen en lila färg och om det finns jäsning blir den gul.
I mikrobiologilaboratorier används laktosbuljong i stor utsträckning eftersom det är ett relativt billigt medium som ger pålitliga och snabba resultat (24-48 timmar)..
Den kan användas för analys av totala och fekala koliformer i mat och vatten eller som en förberikningsbuljong för Salmonella.
Förberikning är ett steg före provberikning, vilket avsevärt förbättrar återvinningen av bakterier av släktet Salmonella i bearbetade livsmedel..
För att göra detta sås provet av den fasta maten (25 gram) eller vätskan (25 ml) i 225 ml laktosbuljong, inkuberas i 24 till 48 timmar. Därefter kommer den att underodlas i ett anrikat medium såsom selenit-cystinbuljong eller tetrationjonbuljong. Fortsätt sedan till XLD- och SS-selektiva medier.
Det är ett utmärkt medium som en indikator på fekal kontaminering.
Därför är laktosbuljong idealisk för den presumtiva fasen av studien av koliformer med metoden Most Probable Number..
För prover där en stor mängd koliformer misstänks inympas en mindre mängd av den (1 ml), medan för prover där en mindre mängd koliformer misstänks inymmas en större volym prover (10 ml) ..
För analysen görs utspädningar 10-1, 10-två, 10-3, bildar ett batteri med 3-5 rör för varje koncentration som används.
Från varje utspädning sås samma volym i laktosbuljongen.
Rören inkuberas i 24 timmar. Negativa buljonger inkuberas i ytterligare 24 timmar.
Tolkningen av resultaten görs genom att observera två egenskaper: det första är närvaron eller frånvaron av grumlighet och eftersom detta medium inte innehåller en pH-indikator kommer ingen färgförändring att ske..
Den andra är produktion eller inte av gas. Gas syns lätt i Durham-röret genom att en eller flera luftbubblor ser ut..
Det anses vara positivt om båda egenskaperna observeras, det vill säga grumlighet med gasproduktion. Positiva rör bör sås igen i bekräftande media (Brilliant Green Bile 2% buljong och EC buljong).
- När du förbereder mediet är det viktigt att inte glömma att placera Durhams-rören om syftet med röret är att studera koliformer..
- Överhett inte mediet innan du steriliserar.
- Fördela i provrör före sterilisering, aldrig efter.
- Använd inte om mediet är mer än 3 månader gammalt..
- Använd inte om du observerar någon förändring i de vanliga egenskaperna hos mediet.
- När du förbereder en sats laktosbuljong, testa kvaliteten på satsen genom att plantera stammar som kallas Escherichia coli, Enterobacter aerogenes , Citrobacter freundii Y Klebsiella pneumoniae. De växer mycket bra med gasproduktion (positiv kontroll).
- Det kan också inkludera Pseudomonas aeruginosa, Salmonella typhimurium eller Enterococcus faecalis, som växer bra, men utan gasproduktion (negativ kontroll).
- Det bör noteras att den ursprungliga färgen på det uttorkade mediet är beige och att det beredda mediet är mycket lätt och transparent gult. Om du ser en förändring i färg eller utseende kan den försämras..
Ingen har kommenterat den här artikeln än.