De tioglykolatbuljong Det är ett anrikat odlingsmedium med flytande konsistens. Det är känt av akronymen FTM för dess akronym på engelska Fluid Thioglycollate Medium. Det skapades av Brewer och modifierades 1944 av Vera, som tillsatte kaseinpepton.
Detta medium har en låg oxidationsreduktionspotential, därför rekommenderas det inte för utveckling av strikta aeroba bakterier, men det är idealiskt för att återhämta fakultativa aeroba, stränga anaeroba och krävande mikroaerofila bakterier..
Den höga prestanda som observerats med detta medium vid isolering och återvinning av en mängd olika mikroorganismer har gjort det accepterat av United States Pharmacopoeia (USP), av Official Association of Agricultural Chemists (AOAC) och av European Pharmacopoeia (EP).
Dessa organisationer rekommenderar den för sterilitetskontrollstest av farmaceutiska produkter och för anrikning av olika typer av prover..
Cado-tioglykolatet består av jästextrakt, pankreasmältning av kasein, vattenfri dextros, L-cystin, natriumklorid, natriumtioglykollat, resazurin och agar i liten mängd.
Det finns flera versioner av detta medium, bland dem är: tioglykolatbuljong med indikator, tioglykolatbuljong utan indikator, tioglykolatbuljong med indikator berikad med hemin och vitamin K1, och kalciumkarbonat-tioglykolatbuljong.
Det bör noteras att tioglykolatbuljongvarianten berikad med hemin och vitamin K tjänar till att öka tillväxten av snabba anaerober, och tioglykolatbuljongvarianten innehållande kalciumkarbonat är användbar för att motverka de syror som produceras under mikrobiell tillväxt..
Artikelindex
Tioglykolatbuljong anses vara ett icke-selektivt anrikningsmedium eftersom det möjliggör tillväxt av de flesta icke-smittsamma bakterier. Näringsbehov tillhandahålls av jästextrakt, bukspottkörteln och glukos.
Å andra sidan innehåller detta medium, trots att det är en buljong, en liten mängd agar; Detta innebär att den har en låg oxidationsreduktionspotential på grund av att det saktar in syreintaget på ett sådant sätt att syret minskar när det går djupare in i röret..
Det är därför detta medium är idealiskt för utveckling av fakultativa aeroba, mikroaerofila och strikta anaeroba bakterier, de senare 2 utan att behöva inkubera under dessa förhållanden. Samma medium reglerar mängden syre i mediet, eftersom det saknas i rörets botten och i tillräcklig mängd på ytan..
På samma sätt fungerar tioglykollat och L-cystin som reducerande medel, vilket hjälper till att förhindra ansamling av ämnen som är skadliga för bakteriell utveckling, såsom peroxid. Dessutom innehåller dessa föreningar sulfhydrylgrupper (-SH-), vilket neutraliserar de hämmande effekterna av kvicksilverderivat, arsenik, bland andra tungmetaller..
Resazurin är för sin del en indikator på oxidreduktion. Detta ämne är färglöst när det är reducerat och rosa när det oxideras. Det finns indikatorer och icke-indikatorer tioglykolatbuljongvarianter. Användningen beror på typ av prov och laboratoriets preferens..
Under tiden upprätthåller natriumklorid den osmotiska balansen i tioglykolatbuljongen och användningen av glukos i vattenfri form förhindrar överflödig fukt i det uttorkade mediet..
Väg upp 29,75 g av det uttorkade mediet och lös upp det i 1 liter destillerat vatten. Blandningen får stå i cirka 5 minuter. Ta till en värmekälla och skaka ofta tills den är helt upplöst..
Häll mediet i provrör och autoklav vid 121 ° C i 15 minuter. Låt svalna före användning. Kontrollera insättningen av kommersiella hus för dess bevarande. Vissa rekommenderar att de förvaras vid rumstemperatur på en mörk plats och andra i kylskåp skyddad från ljus.
PH för det beredda mediet är 7,1 ± 0,2.
Färgen på det uttorkade mediet är ljusbeige och det beredda mediet är ljust bärnstensfärgat med viss opalans..
Det finns kommersiella medel som redan ger hemin och vitamin K1, speciellt för odling av anaerober.
Om det anrikade anaeroba mediet inte är tillgängligt kan den basiska tioglykolatbuljongen beredas. För detta tillsätts 10 mg heminhydroklorid och 1 mg vitamin K.1 för varje liter medium. Om blod eller serum tillsätts till tioglykolatbuljongen är det dock inte nödvändigt att tillsätta hemin eller K-vitamin..
Den kommer kommersiellt och är beredd enligt instruktionerna på insatsen.
Detta har samma sammansättning av det basiska tioglykolatet, men innehåller inte resazurin.
Väg 30 g av det uttorkade mediet och lös upp det i en liter destillerat vatten. Resten av beredningen är densamma som den som beskrivs i tioglykolatbuljongen med indikator.
Tioglykolatbuljong är användbar för anrikning av kliniska prover, särskilt de från sterila platser. Det är också användbart för icke-kliniska prover, såsom kosmetika, läkemedel etc..
För inympning av flytande prover (såsom bland annat CSF, synovialvätska) centrifugeras proverna och därefter tas 2 droppar av sedimentet och placeras i tioglykolatbuljongen. Inkubera vid 35 ° C i 24 timmar. Om det under denna tid inte finns någon tillväxt (grumlighet), inkubera upp till maximalt 7 dagar.
Om provet tas med en pinne, ympas odlingsmediet först i plattor och slutligen införs pinnen i buljongen, den utskjutande delen delas upp och röret täcks och lämnar pinnen inuti. Inkubera vid 35 ° C i 24 timmar, maximalt 7 dagar.
För fasta prover homogeniseras i fysiologisk saltlösning (SSF) och ympas sedan tioglykolatbuljongen med 2 droppar av suspensionen..
Det kan ibland användas som ett transportmedium för prover där det finns misstänkt förekomst av stränga anaerober eller som en reservberikningsbuljong..
Tioglykolatbuljongvarianten med kalciumkarbonat används för underhåll av kontrollstammar under en längre tid, eftersom den har förmågan att neutralisera de syror som produceras genom användning av glukos; dessa syror är giftiga för vissa bakterier.
Tillväxt i tioglykolatbuljongen kommer att observeras av mediumets grumlighet. Det rekommenderas att utföra en Gram-fläck och därefter subkultur i icke-selektiva och selektiva medier, beroende på typ av prov och de misstänkta mikroorganismerna..
För sterilitetskontroll rekommenderas att man inkuberar en eller två buljonger utan ympning. Det förväntade resultatet är en klar buljong utan färgförändring, även om det är normalt att se en liten rosa färg på rörets yta..
För kvalitetskontroll bör mellan 10 - 100 CFU av certifierade kontrollstammar inokuleras, t.ex. Staphylococcus aureus ATCC 6538, Micrococcus luteus ATCC 9341, Bacillus subtilis ATCC 6633, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Clostridium sporogenes ATCC 19404, Clostridium sporogenes ATCC 11437, Bacteroides vulgatus ATCC 8482.
Inkubera vid 30-35 ° C i aerobios under 24 timmar upp till maximalt 3 dagar, eftersom dessa mikroorganismer växer snabbt.
God utveckling förväntas i alla fall utom för Micrococcus luteus Y Bacillus subtilis, där det kan finnas måttlig utveckling.
För kvalitetskontroll av tioglykolatbuljong berikad med hemin och vitamin K1, kontrollstammar kan användas Bacteroides vulgatus ATCC 8482, Clostridium perfringens ATCC 13124 och Bacteroides fragilis ATCC 25285. Det förväntade resultatet är tillfredsställande tillväxt.
-Ibland kan indikatorn för tioglykolatbuljong bli rosa; Detta beror på oxidation av mediet. Om den rosa färgen täcker 30% eller mer av den totala buljongen kan den värmas i ett vattenbad i 5 minuter, kylas igen och användas..
Detta tar bort det absorberade syret och återställer mediet till sin ursprungliga färg. Denna procedur kan bara göras en gång.
-För att förbättra tillväxten av aeroba bakterier bör den inkuberas med locket något löst. Emellertid är det föredraget att för detta ändamål använda en hjärthjärtinfusionsbuljong eller tryptikas-sojabuljong för korrekt utveckling av strikta aerober..
-Frysning av mediet eller överhettning bör undvikas, eftersom båda förhållandena skadar mediet..
-Direkt ljus skadar odlingsmediet, det måste lagras skyddat från ljus.
Ingen har kommenterat den här artikeln än.