De urea buljong Det är ett flytande odlingsmedium som används för att visa närvaron av enzymet ureas i vissa mikroorganismer. Ureas är ett mikrobiellt enzym som produceras på ett konstitutivt sätt, det vill säga det syntetiseras oavsett om substratet som det verkar är närvarande..
Ureasfunktionen är relaterad till nedbrytningen av organiska föreningar. Inte alla mikroorganismer har förmåga att syntetisera detta enzym, varför dess bestämning i laboratoriet gör det möjligt att identifiera vissa bakteriestammar och till och med skilja mellan arter av samma släkt..
Det finns två typer av ureaprov: Stuart och Christensen. De skiljer sig åt i sammansättning och känslighet. Den första är speciell för att visa en stor mängd ureas producerad av arter av släktet Proteus.
Den andra är mer känslig och kan detektera små mängder ureas som genereras sent av andra bakterieslag, såsom Klebsiella, Enterobacter, Staphylococcus, Brucella, Bordetella, Bacillus, Micrococcus, Helicobacter och Mycobacterium.
Stuarts ureabuljong består av urea, natriumklorid, dikaliumfosfat, monokaliumfosfat, jästextrakt, fenolrött och destillerat vatten.
Under tiden består Christensens ureabuljong eller agar av peptoner, natriumklorid, monokaliumfosfat, glukos, karbamid, fenolrött, destillerat vatten och agaragar. Det senare bara om det är det fasta mediet.
Artikelindex
Enzymet ureas hydrolyserar urea för att bilda koldioxid, vatten och två ammoniakmolekyler. Dessa föreningar reagerar för att bilda den slutliga produkten som kallas ammoniumkarbonat..
Stuarts ureabuljong är mer buffrad med ett pH på 6,8. Därför måste mikroorganismen kunna bilda stora mängder ammoniak för att bli fenolröd. PH bör stiga över 8.
Därför är Stuarts ureabuljong selektiv för Proteus-arter, vilket ger positiva resultat inom 24 till 48 timmar efter inkubation, och det är inte effektivt för bakterier som producerar låga mängder ureas eller som långsamt hydrolyserar urea..
Detta beror på att Proteus-arter kan använda urea som kvävekälla. Istället behöver andra ureasproducerande bakterier en ytterligare källa.
Pérez et al. (2002) bestämde att Stuarts ureabuljong var lika effektiv som Christensens ureaagar för att bestämma ureas i jäststammar av släktena Candida, Cryptococcus, Rhodotorula, Trichosporon och Saccharomyces.
Studieförfattarna hävdar att de har uppnått 100% överenskommelse med båda medierna (Stuart och Christensen) när de inkuberar i 24 och 48 timmar; med undantaget att de stammar som lyckades göra media till en stark rosa-fuchsia-färg togs som positiva.
Detta förtydligande är nödvändigt, eftersom Lodder (1970) uppgav att nästan alla jäst lyckas förvandla fasan av Christensens ureaagar till blekrosa. Detta beror på det faktum att de kan hydrolysera urea i små mängder och på grund av bildandet av aminer genom oxidativ dekarboxylering av aminosyrorna på ytan. Detta ska inte tolkas som positivt.
Christensens ureabuljong eller agar är mindre buffrad och kan detektera små mängder ammoniak. Dessutom berikas detta medium med peptoner och glukos. Dessa föreningar får andra ureasproducerande mikroorganismer att växa som inte växer i Stuart-buljong..
På samma sätt erbjuder Christensen urea-test snabbare resultat, särskilt för Proteus, att kunna ge starkt positivt på bara 30 minuter som en minimitid och upp till 6 timmar som en maximal tid.
Resten av de ureasproducerande mikroorganismerna lyckas vända färg på mediet något efter 6 timmar och starkt efter 24, 48, 72 timmar eller mer, och även vissa stammar kan ge svaga reaktioner efter 5 eller 6 dagar.
Mediet är ursprungligen gul-orange i färg och en positiv reaktion kommer att göra färgen på mediet till rosa-fuchsia. Färgens intensitet är direkt proportionell mot mängden ammoniak som produceras.
En negativ reaktion kommer att lämna mediet med den ursprungliga färgen med undantag av jäst, som kan bli blekrosa på Christensens ureaagarmedium..
Väg nödvändiga gram enligt det kommersiella företagets indikationer. Lös upp i helst sterilt destillerat vatten. Använd inte värme för att lösa sig, eftersom urea är känslig för värme.
Membranfiltreringsmetod används för att sterilisera. För detta används ett Millipore-filter med porer med en diameter av 0,45 µm. Använd inte autoklav. När lösningen har filtrerats fördelas den i sterila rör. För att uppnå tillförlitliga resultat bör den överföras mellan 1,5 ml som en minsta kvantitet och 3 ml som en maximal mängd per rör..
Förvara i kylskåp och värm upp före användning..
Om filtreringsmetoden inte är tillgänglig bör mediet användas omedelbart för tillförlitliga resultat..
Ett annat sätt att förbereda Stuarts ureabuljong är följande:
Vissa kommersiella hus säljer basmediet för ureaprovet, inklusive urea..
Den vikt som anges av det kommersiella företaget vägs. Den löses i destillerat vatten och steriliseras i autoklaven vid 121 ° C i 15 minuter. Låt det vila lite och när mediet är varmt, tillsätt 100 ml urealösning beredd med 20% och steriliserad genom filtrering..
Det distribueras i sterila rör, som tidigare beskrivits.
Väg upp 29 g uttorkad karbamid och lös upp i 100 ml destillerat vatten. Använd filtreringsmetoden för att sterilisera. Autoklaver inte.
Lös upp 24 g av den torkade basagaren i 950 ml destillerat vatten. Sterilisera i autoklaven vid 121 ° C i 15 minuter. Låt stå tills den når en temperatur på 50 ° C och tillsätt den tidigare beredda ureaen aseptiskt.
Häll 4 till 5 ml i sterila rör och luta tills de är fasta. Det borde finnas en lång flöjtnäbb.
Detta medium kan också framställas i flytande form.
Urea-testet är extremt effektivt för att skilja släktet Proteus från andra släktingar i familjen Enterobacteriaceae, med tanke på den snabba reaktionen från Proteus..
Med hjälp av Christensen-kompositionen hjälper testet att skilja mellan arter av samma släkte. Till exempel, S. haemolyticus och S. warneri spå Stafylokock koagulasnegativ och beta-hemolytisk, men de skiljer sig åt i det S. haemolyticus är urea negativ och S. warneri är urea-positiv.
Å andra sidan använde McNulty framgångsrikt Christensens 2% ureabuljong för att studera närvaron av Helicobacter pylori i biopsiprover tagna från magslemhinnan (antralregion).
Närvaron av H. pylori det framgår av ett positivt urea-test. Varaktigheten för att observera resultaten är direkt proportionell mot mängden närvarande mikroorganismer.
Som kan ses är det en enkel metod för diagnos av Helicobacter pylori i gastriska biopsier.
Slutligen är detta test också användbart för att differentiera arter av släktena Brucella, Bordetella, Bacillus, Micrococcus och Mycobacteria..
Båda metoderna kräver en stark mikrobiell ympning för att optimera resultaten. Bakteriekolonier tas företrädesvis från blodagar och jäst från Sabouraud agar, med några få undantag. Inokulatet emulgeras i det flytande mediet.
För Stuarts ureabuljong, inkubera vid 37 ° C i 24 till 48 timmar, med vetskap om att du bara letar efter stammar av släktet Proteus när stammen är en bakterie. För jäst kan den inkuberas vid 37 ° C eller vid rumstemperatur under 24 till 48 timmars inkubation.
När det gäller Christensens ureabuljong inkuberas den vid 37 ° C i 24 timmar. Om testet är negativt kan det inkuberas i upp till 6 dagar. Om testet är positivt före 6 timmar indikerar det att det är en stam av släktet Proteus.
I fallet med Christensens ureaagar ympas agarens fas utan att punkteras. Buljongen inkuberas och tolkas på samma sätt.
Kontrollstammar som Proteus mirabilis ATCC 43071, Klebsiella pneumoniae ATCC 7006003, Escherichia coli ATCC 25922 och Salmonella typhimurium. De två första bör ge positiva resultat och de två sista negativa resultaten..
Ingen har kommenterat den här artikeln än.