De medium OF eller glukosfermenteringsagar är en halvfast agar speciellt utformad för studier av oxidativ och fermentativ metabolism av kolhydrater i en viktig grupp andra mikroorganismer än Enterobacteriaceae, kallad icke-enterisk gramnegativa baciller.
Det skapades av Hugh och Leifson; dessa forskare insåg att konventionella metoder för att studera syraproduktion från kolhydrater inte var lämpliga för denna specifika grupp av bakterier.
Detta beror på att icke-enteriska gramnegativa stavar generellt producerar låga mängder syror, till skillnad från Enterobacteriaceae..
I denna mening har OF-mediet speciella egenskaper som kan detektera små mängder syra som bildas, både genom oxidations- och fermentationsvägar. Dessa skillnader är relaterade till mängden peptoner, kolhydrater och agar..
Detta medium innehåller mindre peptoner och en högre koncentration av kolhydrater, vilket minskar de produkter som alkaliserar mediet som ett resultat av proteinmetabolism och ökar produktionen av syror på grund av kolhydratanvändningen..
Å andra sidan gynnar minskningen av mängden agar spridningen av syran som produceras genom mediet, förutom att vi kan observera rörlighet.
OF-medium består av pepton, natriumklorid, bromotymolblått, dikaliumfosfat, agar och ett kolhydrat. Det vanligaste kolhydratet är glukos, men andra kan användas enligt det du vill studera, såsom laktos, maltos, xylos, bland andra..
Artikelindex
Liksom alla odlingsmedier måste OF-medium innehålla näringsämnen som garanterar bakterietillväxt. dessa ämnen är peptoner.
För sin del ger kolhydrater energi och tjänar samtidigt till att studera mikroorganismens beteende mot den, det vill säga det gör att bakterierna kan klassificeras som en oxidativ, fermenterande eller icke-sackarolytisk organism..
OF-medium innehåller ett förhållande 1: 5 pepton / kolhydrat i motsats till 2: 1 konventionellt medium. Detta säkerställer att mängden alkaliska aminer som bildas från nedbrytningen av peptoner inte neutraliserar bildandet av svaga syror..
Å andra sidan innehåller mediet natriumklorid och dikaliumfosfat. Dessa föreningar stabiliserar mediet osmotiskt och reglerar pH respektive. Bromotymolblått är pH-indikatorn, som förvandlar färgen på mediet från grönt till gult med produktion av syra..
Vissa mikroorganismer kan använda kolhydrater genom oxidations- eller jäsningsvägarna, medan andra inte tar någon av de två vägarna..
Detta beror på egenskaperna hos varje mikroorganism. Till exempel kan vissa strikta aeroba mikroorganismer oxidera vissa kolhydrater, och fakultativa anaerober kan oxideras och jäsa beroende på omgivningen, medan andra inte oxiderar eller fermenterar kolhydrater (asakarolytiska).
Slutligen finns det en modifiering av OF-mediet som rekommenderas av CDC som innehåller en speciell OF-bas med fenolrött som indikator..
Glukosoxidationsprocessen kräver inte glukosfosforylering, liksom fermenteringsprocessen. I detta fall oxideras aldehydgruppen till en karboxylgrupp, vilket resulterar i glukonsyra. Detta i sin tur oxideras till 2-ketoglukonic.
Den senare ackumuleras antingen eller bryts ner till två molekyler pyruvsyra. Detta system kräver närvaro av syre eller någon oorganisk förening som den slutliga elektronacceptorn..
Produktionen av syror på denna väg är svagare än den som erhålls genom fermenteringsvägen.
För att jäsning av glukos ska ske på någon av de tillgängliga vägarna måste den först fosforyleras och bli glukos-6-fosfat.
Glukosjäsning kan ta flera vägar, den viktigaste är Embden-Meyerhof-Parnas-vägen, men de kan också ta Entner-Doudoroff-vägen, eller Warburg-Dickens hexosmonofosfatväg, även känd som nedbrytningen av pentoser.
Den valda vägen beror på det enzymatiska systemet som mikroorganismen har..
Vid jäsning av glukos genom Embden-Meyerhof-Parnas-vägen delas den i två triomolekyler för att sedan brytas ned till olika kolföreningar tills den når bildningen av glyceraldehyd-3-fosfat. Därifrån har en mellanliggande substans sitt ursprung, som är pyruvinsyra..
Därifrån kommer olika typer av blandade syror att bildas som kan variera från en art till en annan..
Detta system inträffar i frånvaro av syre och kräver en organisk förening som den slutliga elektronacceptorn..
Vid jäsning av glukos via Entner-Doudoroff-vägen blir glukos 6-fosfat glukono-ᵼ-lakton-6-fosfat och därifrån oxideras det till 6-fosfoglukonat och 2-keto-3-deoxi-6- fosfoglukonat, till slutligen bilda pyruvinsyra. Denna väg behöver syre för att glykolys ska uppstå.
Denna rutt är en hybrid av föregående 2. Det börjar likna Entner-Doudoroff-vägen, men senare bildas glyceraldehyd-3-fosfat som en föregångare till pyruvinsyra, som sker i Embden-Meyerhof-Parnas-vägen..
Väga:
2 g pepton
5 g natriumklorid
10 g D-glukos (eller kolhydraten som ska beredas)
0,03 g bromotymolblått
3 gr agar
0,30 g dikaliumfosfat
1 liter destillerat vatten.
Blanda alla föreningar utom kolhydraten och lös upp i 1 liter destillerat vatten. Värm upp och skaka tills den är helt upplöst.
Vid kylning till 50 ° C tillsätt 100 ml 10% glukos (filtrerad).
Fördela aseptiskt 5 ml OF-medium i bomullstoppade provrör och autoklav vid 121 ° C, 15 pund tryck i 15 minuter.
Låt stelna i vertikalt läge.
Mediets pH bör vara 7,1 Färgen på det beredda mediet är grönt.
Förvara i kylskåp.
OF-mediet är ett speciellt medium för att bestämma en mikroorganisms metaboliska beteende mot kolhydrater. Speciellt för de som bildar små, svaga eller inga syror.
För varje mikroorganism behövs 2 OF-rör, båda måste inokuleras med mikroorganismen som ska studeras. Kolonin tas med ett rakt handtag och en punktering görs i mitten av röret utan att nå botten; flera punkteringar kan göras, så länge det inte finns något intresse för att observera rörlighet.
Ett skikt av sterilt flytande vaselin eller sterilt smält paraffin (ungefär 1 till 2 ml) tillsätts till ett av rören och märks med bokstaven "F". Det andra röret lämnas original och är märkt med bokstaven "O". Båda rören inkuberades vid 35 ° C och observerades dagligen i upp till 3 till 4 dagar..
Tabell: Klassificering av mikroorganismer efter deras beteende i öppna (oxidativa) och slutna (fermentativa) AV rör
Gasen observeras med bildandet av bubblor eller förskjutning av agaren.
Det bör noteras att en organism som bara oxiderar glukos men inte fermenterar den inte heller kommer att kunna fermentera andra kolhydrater, i alla fall oxiderar den bara. Därför kommer det förseglade röret för studier av andra kolhydrater att utelämnas..
Dessutom kan rörlighet ses i OF-mediet.
Positiv rörlighet: tillväxt som inte är begränsad till inokulationszonen. Det växer mot rörets sidor.
Negativ rörlighet: endast tillväxt i den ursprungliga ympningen.
Följande stammar kan användas som kvalitetskontroller: Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa Y Moraxella sp. De förväntade resultaten är:
-Vissa mikroorganismer kan inte växa i OF-medium. I dessa fall upprepas testet men 2% serum eller 0,1% jästextrakt tillsätts till mediet..
-Oxidationsreaktioner observeras ofta bara nära ytan och resten av mediet kan förbli grönt, på samma sätt anses det vara positivt.
Ingen har kommenterat den här artikeln än.