Katalas test motiv, teknik och användningsområden

4631
Robert Johnston

De katalastest är en metod som används i bakteriologilaboratorier för att avslöja närvaron av katalasenzymet i de bakterier som har det. Tillsammans med Gram-fläcken är de de viktigaste testerna som ska utföras på nyligen isolerade mikroorganismer. Dessa tester guidar mikrobiologen om stegen som ska följas för den slutgiltiga identifieringen av mikroorganismen i fråga..

I allmänhet har bakterier som innehåller cytokrom enzymkatalaset, vilket innebär att fakultativa aeroba och anaeroba bakterier bör ha det. Det finns dock undantag, såsom Streptococcus, som trots att de är fakultativa anaeroba mikroorganismer inte har enzymkatalas.

Kör Catalase Test, visar en positiv reaktion. Källa: Ingen maskinläsbar författare tillhandahålls. Nase antas (baserat på upphovsrättsanspråk). [CC BY-SA 3.0 (http://creativecommons.org/licenses/by-sa/3.0/)]

Det är därför som katalastestet huvudsakligen används för att skilja Staphylococaceae- och Micrococaceae-familjerna (båda katalaspositiva) från Streptococaceae-familjen (katalasnegativa)..

På samma sätt skiljer sig släktet Bacillus (katalaspositivt) från släktet Clostridium (katalasnegativt), bland andra.

Artikelindex

  • 1 Motivering
  • 2 Rutinmässig teknik för katalastest
    • 2.1 -Slide-metod
    • 2.2-Direkt metod i ren kultur
    • 2.3-Metod med kapillärrör eller Fung och Petrishko
    • 2.4 -Taylor- och Achanzar-metod för katalastester som ger tvivelaktiga
  • 3 Katalastest för Mycobacterium-arter
    • 3.1 -Material
    • 3.2-Beredning av reagenser
    • 3.3 -Procedur
  • 4 Använd
  • 5 Kvalitetskontroll
  • 6 Begränsningar
  • 7 Referenser

Grund

Katalas är ett enzym som klassificeras som hydroperoxidas, det betyder att de använder väteperoxid (HtvåELLERtvå).

Det anses också vara ett oxidoreduktas, eftersom det i reaktionen där det deltar finns ett element som fungerar som en elektrondonator (reducerande substans) och en annan som en elektronreceptor (oxiderande substans).

Katalas är ett protein som innehåller en proserisk grupp med fyra trevärda järnatomer (Fe+++), därför är det ett homoprotein. Ferjonjonen förblir oxiderad under reaktionen.

Man kan säga att katalas är ett avgiftande enzym, eftersom dess funktion är att eliminera ämnen som produceras under bakteriell metabolism som är giftiga för bakterier. Bland dessa ämnen finns väteperoxid.

Väteperoxid bildas genom nedbrytning av sockerarter aerobt. Denna process sker enligt följande:

Superoxiden (Otvå-(fri radikal) bildas som slutprodukten av assimileringen av glukos genom den aeroba vägen. Detta är giftigt och elimineras av enzymet superoxiddismutas som omvandlar det till gasformigt syre och väteperoxid.

Väteperoxid är också giftigt för bakterier och måste avlägsnas. Enzymkatalaset bryter ner väteperoxid till vatten och syre.

Katalas kan verka på andra substrat än väteperoxid, såsom alkoholer, aldehyder, syror, aromatiska aminer och fenoler. Väteperoxid kan emellertid också användas av katalas för att oxidera andra toxiska föreningar såsom metyl och etylalkohol..

På samma sätt är katalas närvarande i fagocytiska celler, vilket skyddar det från den toxiska effekten av väteperoxid..

Rutinmässig teknik för katalastest

-Bildmetod

Material

3% väteperoxid (10 volymer).

Mikroskopglas

Engångs plasthandtag eller tandpetare av trä.

Bearbeta

Ta en tillräcklig mängd av kolonin för att studera utan att röra vid agaren från vilken den kom. Kolonin måste vara fräsch, det vill säga från en kultur på 18 till 24 timmar.

Placera kolonin på den torra bilden och lägg till en droppe 3% väteperoxid (du kan också använda HtvåELLERtvå 30%). Observera omedelbart om bubblor släpps eller inte.

Tolkning

Positiv reaktion: utveckling av gas, vilket framgår av bildandet av bubblor (stark bubblande).

Negativ reaktion: ingen bubbelbildning.

-Direkt metod i ren kultur

Placera 1 ml HtvåELLERtvå 3% på en ren platta eller kilkultur som inte innehåller blod (helst näringsagar). Observera om det finns bubbelbildning omedelbart eller inte. Du kan också använda HtvåELLERtvå 30%.

Det tolkas på samma sätt som porta-objektmetoden.

-Kapillärrör eller Fung and Petrishko-metod

Fyll ett 67 mm kapillärrör till en höjd av 20 mm med 3% väteperoxid efter kapillaritet.

Rör vid den isolerade kolonin som ska studeras med kapillären full av HtvåELLERtvå vid 3%. Observera om kapillären fylls med bubblor på cirka 10 sekunder. Denna metod möjliggör halvkvantifiering av reaktionen i korsningar:

Inga korsningar, inga bubblor (negativ reaktion).

+ --Få bubblor (svag eller fördröjd reaktion).

++ -Rikliga bubblor (måttlig reaktion).

+++ -Bubblor når motsatt extrem (energisk reaktion).

-Taylor och Achanzar-metoden för tveksamma katalastester

Placera en isolerad koloni på en ren, torr bild och placera sedan en droppe H.tvåELLERtvå 0,5% och täck med ett täckglas. Observera huruvida det bildas fångade bubblor eller inte.

Tolkning: närvaron av bubblor indikerar en positiv reaktion. Inga bubblor, det tolkas som en negativ reaktion.

Katalastest för Mycobacterium-arter

Denna teknik måste göras genom att kontrollera pH och temperatur. Den måste utföras under en laminär flödeskåpa, eftersom manipulationen av de olika Mycobacterium-arterna är farlig.

-Material

Väteperoxid 30% eller 110 volymer (superoxal).

Fosfatbuffert pH 7

10% mellan 80

Mycobacterium kilkultur i 3 till 4 veckor

-Förberedelse från reagens

Fosfatbuffert pH 7

Väga:

1,361 g (KHtvåPO4vattenfritt monokaliumfosfat.

1,420 g vattenfritt dinatrium (Na2HPO3) fosfat.

Lös upp båda salterna i lite sterilt destillerat vatten och fyll upp till 1000 ml med vatten.

10% mellan 80

Gör en 1:10 utspädning till Tween 80 som är kommersiellt koncentrerad, för att göra detta fortsätt enligt följande:

Ta 1 ml Tween 80 och lägg den i lite destillerat vatten, lös upp och fyll sedan på volymen med vatten upp till 10 ml.

Slutlig reagens

Blanda en mängd fosfatbuffert med en mängd av 10% Tween 80 (i lika delar). Definiera i laboratoriet hur mycket du vill förbereda.

-Bearbeta

Placera 5 ml fosfatbuffert i ett sterilt provrör med skruvlock (bakelit).

Ta en tillräcklig koloni av en Mycobacterium-tillväxt sådd i kilar med en ympningsslinga och lös upp i fosfatbufferten.

Sätt på röret utan att dra åt tråden för hårt. Placera i ett vattenbad vid 68 ° C i 20 till 30 minuter. Ta bort och svalna till 22-25 ° C

Mät 0,5 ml av det slutliga reagenset (blanda) och tillsätt det till röret med den kalla lösningen. Observera bildandet av bubblor eller inte.

Det tolkas på samma sätt som de tidigare teknikerna.

Använda sig av

När kolonitillväxt erhålls i anrikat medium måste en Gram-fläck och ett katalastest utföras på de erhållna kolonierna. Detta kommer att vägleda mikrobiologen om de procedurer som ska följas för definitiv identifiering..

Källa: Utarbetad av författaren MSc. Marielsa gil

 QA

För att utvärdera den goda prestandan hos väteperoxidreagenset, använd nyodlade kontrollstammar, t.ex. Staphylococcus aureus som en positiv kontroll och stammar av Streptococcus sp som negativ kontroll.

Ett annat alternativ som fungerar som en positiv kontroll är att placera en droppe väteperoxid på blodagaren, erytrocyterna har katalas, därför kommer det att bubbla om reagenset är i gott skick.

En chokladagar kan användas som en negativ kontroll, här lyser erytrocyterna redan och testet är negativt.

Begränsningar

-Använd inte gamla kulturer för testet, eftersom det kan leda till falska negativ.

-Undvik att ta kolonier från blodagarkulturer, om du inte är i kontakt med agaren. denna procedur kan leda till falska positiva, eftersom erytrocyter innehåller katalas.

-Om du tar platinaslinga-köln ska du inte vända proceduren eftersom det kan leda till falska positiva effekter. Detta beror på att platina kan reagera med väteperoxid och orsaka bubblande..

-Använd inte väteperoxidreagenset om det är mycket gammalt, eftersom reagenset är mycket instabilt och tenderar att brytas ner över tiden..

-Förvara väteperoxidreagenset skyddat från ljus och kylt för att undvika skador..

-Utför en kvalitetskontroll av väteperoxidreagenset varje gång det används.

-Tänk på att om HtvåELLERtvå vid 30% är reaktionerna starkare än de som utförs med HtvåELLERtvå vid 3%.

Referenser

  1. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnos. 5: e upplagan Redaktionellt Panamericana S.A. Argentina.
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnos. 12 utgåva Redaktionellt Panamericana S.A. Argentina.
  3. Mac Faddin J. (2003). Biokemiska tester för identifiering av bakterier av klinisk betydelse. 3: e upplagan Ledare Panamericana. Buenos Aires. Argentina.
  4. BD Laboratories. Catalase-Gotario-reagens. Finns på: http://winklerltda.cl
  5. Vadequímica Laboratories. Peroxid. Likvärdighet mellan volymer och procent. Finns på: vadequimica.com

Ingen har kommenterat den här artikeln än.