De xantoproteinreaktion är ett kemiskt förfarande som används för att bestämma närvaron eller frånvaron av aromatiska aminosyror, såsom tyrosin och tryptofan, som kan vara i fri form eller utgör lösliga proteiner, peptider eller polypeptider.
Det har också använts för att detektera giftiga ämnen i blodet som innehåller en bensengrupp i sin struktur. Detta test är också känt som xanthoprotein Becher-reaktionen..
Xantoproteinreaktionen använder koncentrerad salpetersyra, värme och en neutraliserande alkali. Om lösningen blir från gul till orange när reaktionen neutraliseras anses testet vara positivt. Den observerade färgen beror på bildningen av kväveföreningar härledda från nitrifikering av bensengrupper.
Om mängden totalt protein behöver kvantifieras är det nödvändigt att använda andra proteinbestämningsmetoder, såsom Biuret..
Xantoproteinreaktionen används främst när ämnen vars kemiska sammansättning inte är känd analyseras. Denna reaktion är vanligtvis en del av en uppsättning tester som hjälper till att bestämma den kemiska sammansättningen av ett visst ämne eller extrakt. Det är därför det används i stor utsträckning av forskare.
Å andra sidan används Becher xanthoprotein-reaktionen för att detektera fenol- och indolsubstanser i blodet, vilket gör det möjligt att förutsäga uppkomsten av nefropati innan andra senare parametrar ökas..
Artikelindex
Reaktionen detekterar i grunden närvaron av bensengruppen, både i aminosyror, liksom i proteiner och peptider. Salpetersyra verkar på bensenringen av aminosyror som har den och bildar fenoliska nitroföreningar.
Reaktionen behöver värme utföras, i allmänhet bildas en fällning som fördunklar mediet och gör det mjölkigt. Fällningen kan vara vit eller gul. Slutligen kräver det ett alkaliseringssteg som accentuerar färgen. För detta används en bas såsom 40% natriumhydroxid eller ammoniak..
Reaktionen tolkas som positiv om en stark gul färg observeras under uppvärmningsprocessen eller mörkorange när reaktionen alkaliseras. Aminosyrorna som det upptäcker är huvudsakligen tyrosin och tryptofan.
När det gäller fenylalanin, även om det är en aromatisk aminosyra, är bensenkärnan i denna aminosyra svår att nitreras i en enkel reaktion, därför kommer den att avge antingen en negativ eller svag positiv reaktion.
Generellt kan xantoproteintestet kompletteras med Hopkins-Cole-testet, som används för att specifikt identifiera tryptofan. Om xantoproteintestet är positivt och Hopkins-Cole-testet är negativt utesluts närvaron av tryptofan i den lösningen, vilket pekar på närvaron av tyrosin. På samma sätt kan det också kompletteras med Millon-reaktionen för detektion av tyrosin, bland annat..
Denna reaktion kan också användas på prover av blod, plasma eller desalbuminerat serum för diagnos av uremi eller njursvikt. I det här fallet är det som eftersträvas att upptäcka giftiga ämnen (fenol och indol) som produceras genom tarmförruttning..
Dessa ämnen har bensengruppen och ger därför en positiv xantoproteinreaktion, även om den reagerande substansen varken är en aminosyra eller ett protein..
Placera 1 ml av provet i ett rent, torrt provrör.
-Tillsätt 0,5 ml koncentrerad salpetersyra.
-Inkubera blandningen i ett vattenbad vid 70 ° C i 2 minuter. Förbered vattenbadet tidigare vid den nämnda temperaturen.
-När du tar bort röret från vattenbadet är det möjligt att observera att lösningen har blivit mjölkaktig och fått en viss gulvit färg..
-Lösningen kyls genom att släppa kallt vatten vid rörets botten..
-Beredningen görs alkalisk genom att långsamt tillsätta (droppe för droppe) en 40% natriumhydroxidlösning tills det finns en färgförändring.
-Om testet är positivt kommer en mörkorange ring att bildas vid vätskans gränssnitt..
-Om reaktionen är negativ blir det ingen färgbildning.
-Tillför 5 cc 20% triklorättiksyra på 5 cc venöst blod, plasma eller serum, varvid den senare är den mest angivna. Blanda väl och filtrera.
-2 ml av filtratet tas och blandas med 0,5 ml salpetersyra. Därefter värms den till kokning, för detta placeras röret direkt över den lättare lågan i 30 sekunder. Den kyls med vatten och 1,5% natriumklorid 33% tillsätts..
Det tolkas på följande sätt:
-Negativt resultat: gulaktig färg.
-Positivt resultat (+) citrongul.
-(++) gyllengul.
-(+++) mörkgul till brun
Det kan också tolkas med hjälp av en referens Autenrieth kolorimetrisk skala, bestående av olika koncentrationer av kaliumdikromat. Detta framställs i 10 i 10 utspädningar från en 0,03874% stamlösning. Varje rör representerar en procentsats.
Det finns två tolkningsskalor som kallas forntida och moderna. De normala värdena är:
Gammalt bord: mellan 75 och 85%
Modernt bord: mellan 15 och 25%
Om provrörets färg är i mitten av två standardrör görs ett medelvärde mellan de två mätningarna.
Standardlösning av kaliumdikromat framställs enligt följande: 7,9 ml 10 N kaliumdikromat mäts och fylls upp till 100 ml i en mätkolv. För spädningar, följ som visas i den kolorimetriska tabellen Autenrieth..
Användningen av xantoproteinreaktionen är en del av en uppsättning biokemiska tester som hjälper till att lära känna den kemiska sammansättningen av någon okänd substans. Detta test bidrar till kemisk analys av detekteringen av proteiner som innehåller bensengrupper i sin struktur..
Denna reaktion används ofta av forskare i olika studier av ämnen av intresse..
I denna bemärkelse använde Vásquez-Jorge och medarbetare denna och andra reaktioner för att undersöka proteinhalten i vätskor extraherade från mangroveostern. (Crassostrea rhizophorae).
På samma sätt använde Rojas et al. (2009) en serie tester, inklusive xantoproteinreaktionen, för att analysera glykomakropeptider i ricotta vassleutfällningar..
Å andra sidan modifierades Becher-xantoproteinreaktionen av Volhard för att användas för andra ändamål. I detta fall, för detektion av fenol- och indolämnen som kan stiga mycket tidigare (veckor eller månader) innan nivåerna av urea och kvarvarande kväve i blodet ökar..
Dessa giftiga avfall bildas från matens tarmförrotning.
Dessa ämnen ackumuleras i blodet när de inte elimineras korrekt, och därför kan ett positivt xantoproteintest förutsäga tidig början av korrekt njursvikt eller ett tillstånd av uremi..
Beroende på färgens intensitet kan du bestämma hur avancerad den är. I detta fall är testet kvantitativt.
Hos friska människor ger detta test en svag gul färg, motsvarande de normala nivåerna av tryptofan och tyrosin som kan finnas i blodet.
Medan xantoproteinreaktionen hos njurpatienter är starkt positiv på grund av närvaron av följande ämnen: fenol, indol, parakresol, aromatiska oxisyror, bland andra.
Detta test måste utföras av utbildad personal. Alla biosäkerhetsbestämmelser måste beaktas, eftersom reagenserna är frätande syror och baser..
Om några droppar salpetersyra av misstag faller på huden eller naglarna blir de gula eftersom båda strukturerna innehåller proteiner. Dessutom orsakar det svåra brännskador på huden och slemhinnorna.
Om hudkontakt uppstår bör protokollet följas att tvätta området omedelbart med tvål och vatten i cirka 20 minuter..
Om det stänker i ögonen ska det tvättas med mycket färskt vatten och försöka hålla ögonen öppna..
Ingen har kommenterat den här artikeln än.