De hematoxylin-eosin fläck är en färgningsteknik som använder kombinationen av hematoxylin- och eosin-färgämnen. Detta par färgämnen gör en perfekt duo, eftersom hematoxylin fungerar som ett grundläggande färgämne och eosin är ett syrafärgämne..
Beteckningen av basiska eller sura färgämnen hänvisar inte till pH-värdet de uppnår i lösning, utan talar snarare om den rådande andelen i termer av de anjoniska eller katjoniska laddningarna de har eller genom platsen för kromoforgruppen..
I denna mening anses hematoxylin vara ett basiskt (katjoniskt) färgämne och har därför en affinitet för syrastrukturer, såsom cellkärnan. Medan eosin, som är ett surt (anjoniskt) färgämne, har en affinitet för alkaliska eller basiska strukturer, såsom cellcytoplasma.
Av denna anledning används denna kombination av färgämnen i stor utsträckning för vävnadsfärgning, eftersom det gör det möjligt att tydligt skilja kärnor och cytoplasmer. Kärnor fläckar mörkblå eller lila och cytoplasmrosa.
Hematoxylin-eosin-färgning är en av de mest använda färgningsteknikerna inom området histologi och cytologi på grund av dess enkla hantering och låga kostnad. Det används för visualisering av celler, tjocka nervfibrer och närvaron av vissa mikroorganismer i vävnaderna, såsom: parasiter, svampar och bakterier, bland andra.
Artikelindex
Hematoxylin är ett neutralt färgämne. Komponenten som ger färgen (kromofor) är dock belägen i molekylens katjoniska eller basiska centrum. Därav dess affinitet för syrastrukturer. Dess kemiska formel är C16H14ELLER6 och dess vetenskapliga namn 7,11b-dihydroindeno [2,1-c] kromen-3, 4,6a, 9,10 (6H) -pentol.
Det fläckar främst cellernas kärnor, eftersom de är mycket rika på nukleinsyror. Det kan också fläcka cytoplasmatiska inneslutningar av viralt ursprung.
För att hematoxylin ska fläckas måste det vara i oxiderat tillstånd och bundet till en metall. Den senare tjänar till att fixera till vävnaden, det vill säga den kommer att fungera som en mordant.
När hematoxylin oxideras kallas det hematein. Oxidation uppnås genom exponering för syre (åldrande) av reagenset eller av ämnen som hjälper dess oxidation (kemisk oxidation).
Eosin är ett färgämne som fläckar rött eller rosa. Det är olösligt i vatten även om det finns en vattenlöslig version. Generellt framställs eosin genom upplösning i alkohol (95 ° etanol).
Det fläckar cytoplasmer, muskelfibrer, cytoplasmiska organeller och kollagen, men fläckar inte cellkärnor. Detta beror på att det är negativt laddat, därför har det en affinitet för positivt laddade strukturer..
Det finns två typer av eosin "Y" och "B". Eosin "Y" är känt som gult eosin. Dess vetenskapliga namn är tetrabromo ores uorescein och dess kemiska formel är CtjugoH8Br4ELLER5.
Å andra sidan kallas eosin "B" ibland för blåaktig erytrosin B. Dess vetenskapliga namn är dibromodinitro ores uorescein och formeln är CtjugoH8BrtvåNtvåELLER9. Båda är väldigt lika och skillnaden mellan att använda den ena eller den andra är inte märkbar. Men det mest populära är eosin "Y".
Eosin har egenskapen att skilja mellan en levande cell och en död, eftersom den bara kan passera membranet för att fläcka dess cytoplasma när cellerna är döda och lämna cellens cytoplasma färglös om den förblir vid liv.
Med hematoxylin-eosin kan tjocka nervfibrer färgas och identifieras. Det är dock inte användbart för färgning av de tunna nervfibrerna, eftersom en silverfärgning krävs för att visualisera de senare..
Vid färgning av det kåta lagret i huden är färgämnet som verkar eosin, eftersom cellerna på denna nivå inte har någon kärna.
I hudens granulära lager fläckar hematoxylin starkt keratohyalinkornen inuti granulcellerna. Tvärtom är hudens ryggskikt svagt färgat med hematoxylin, medan bas- eller groddskiktet är tillräckligt färgat.
Eosin fläckar cytoplasman i alla celler och intensiteten i färgen kan variera från ett lager till ett annat..
Gómez et al., 2005 visade att färgning av hematoxylin-eosin var mer effektivt för att identifiera fall av amoebiasis på grund av Entamoeba histolytica Y Entamoeba dispar än den nya visualiseringsmetoden (saltlösning och lugol) hos patienter med akut diarrésjukdom.
Det har också visat sig vara mycket känsligt för att detektera erytrofagocytos (amöber som har uppslukat erytrocyter).
Walwyn et al., 2004 föreslog användning av histologiska fläckar för att detektera infektionsframkallande mikroorganismer.
Med hjälp av hematoxylin-eosin-färgning kunde de visualisera infektioner orsakade av Clostridium, Actinomyces, spiriller eller Candida. De lyckades också observera förekomsten av parasiten Sarcoptes escabiei i hudavsnitt och virala inneslutningar av cytomegalovirus och herpes i sektioner av olika vävnader.
Histologisk sektionsfärgning går igenom en serie steg. Det första är att få den histologiska sektionen. Detta måste vaxas för att senare få skärningarna (ultrafina) med en mikrotom. Tekniken består av följande steg:
1-Eliminering av överskott av paraffin: för detta kan du använda xylol eller Heme-D, doppa i 3-5 minuter.
2-rehydrering av provet: Detta åstadkommes genom nedsänkning av provet i olika alkoholkoncentrationer (etanol) i fallande ordning (100 °, 90 °, 70 °). I alla fall i 7 minuter.
3-Eliminering av överskott av alkohol: för att göra detta, är det nedsänkt i vatten i 7 minuter.
4-färgning med hematoxylin: provet nedsänks i 6-10 minuter i en bricka innehållande hematoxylin. Exponeringstiden beror på provets storlek och tjocklek..
5-Eliminering av överskott av hematoxylin: Det tvättas med vatten i 5 minuter och sedan genomförs en snabb passage (10-20 sekunder) genom sur alkohol. Senare tvättas den med vatten igen i 5 minuter. Sedan nedsänks den i etanol vid 96 ° i 1 minut.
6-färgning med eosin: för detta nedsänks provet i 5 minuter i eosinbrickan.
7-uttorkning av provet: för detta passeras alkoholbrickorna (etanol) igen, men den här gången i stigande ordning. (70 °, 90 °, 100 °). (I 5 sekunder, 5 sekunder respektive 1 minut).
8-Förtydligande av provet: för detta exponeras den för xylol i 5-10 minuter och torkas för att täta permanent med Canada balsam eller annat liknande material.
Ett utstryk görs med patientens avföring på ett objektglas och fixeras med 80% alkohol i 5 minuter. Arket nedsänktes i hematoxylin i 5 minuter och tvättades omedelbart med vatten..
Därefter nedsänks den snabbt i sur alkohol och sedan i ammoniakvatten. Det tvättas med vatten. Den färgas i 5 minuter i eosin. Provet dehydratiseras som förklarats i känd teknik och slutligen sköljs det med xylen.
I en liter destillerat vatten löses 50 gram kalium eller ammoniumaluminiumsulfat. När det är helt upplöst, tillsätt 1 gram kristalliserat hematoxylin. Vid fullständig upplösning tillsätts 1 g citronsyra tillsammans med 50 g klorhydrat och 0,2 g natriumjodat..
Blandningen kokas i 5 minuter, får sedan svalna och filtreras för att avlägsna kvarvarande fasta partiklar. Det så framställda reagenset kan användas omedelbart.
Den kan beredas med en alkoholbas eller med en vattenbas.
I 100 ml etanol vid 95 ° löses 0,5 gram eosin "Y". Tillsätt sedan några droppar isättika.
I 1250 ml destillerat vatten löses 25 gram vattenlösligt eosin "Y". Tillsätt sedan några droppar isättika.
Mät 0,5 ml koncentrerad saltsyra och fyll upp till 100 ml med absolut alkohol.
Mät 0,5 ml koncentrerad ammoniak och fyll upp till 100 ml med destillerat vatten.
Ingen har kommenterat den här artikeln än.