De Kinyoun fläck är en färgningsteknik som används för att fläcka syrafasta bakterier och parasiter. Det föddes genom modifieringen av Ziehl-Neelsen-färgen; Båda teknikerna tolkas på samma sätt men skiljer sig åt i två element: vid beredningen av huvudreagenset och genom att Kinyoun-tekniken inte använder värme.
Av denna anledning är det också känt som kallmodifierad Ziehl-Neelsen eller Kinyoun kallfläck. Det är indikerat för färgning av Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium leprae, atypiska mykobakterier, Nocardias sp, Cryptosporidium parvum, Cryptosporidium meleagridis, Cryptosporidium felis, Cryptosporidium muris Y Cyclosporas cayetanensis.
Det är värt att notera att Nocardia fläckar svagt med denna teknik eftersom de är delvis syra-alkoholresistenta, så för detta släkte finns en modifiering av metoden.
I sin tur har den kalla Kinyoun-tekniken kombinerats med trichrome-tekniken modifierad av Didier för detektion av coccidia (Cryptosporidium parvum och Isospora belli) och mikrosporidiasporer (Enterocytozoon bieneusi Y Encephalitozoon intestinalis).
Artikelindex
Huvudfärgningsreagenset är karbolfuchsin eller karbolfuchsin, som har egenskapen att binda till de karbolsyra som finns i den vaxartade cellväggen, rik på lipider (mykolsyror) hos mykobakterier och vissa parasiter..
Denna bindning motverkas inte av syrablekmedlet; därför definieras mikroorganismer som syra-alkoholresistenta.
Till skillnad från Ziehl-Neelsen-tekniken - som fixerar färgämnet genom värme - i Kinyoun-tekniken är detta steg inte nödvändigt, eftersom carbol-fuchsinlösningen förberedd för denna teknik innehåller en hög koncentration av fenol..
Fenol löser upp lipidmaterialet i cellväggen, så att karbolfuchsinfärgämnet tränger in. Efter att färgämnet tränger igenom förblir det fast trots tvättning med syraalkohol.
På detta sätt får syrabeständiga mikroorganismer den karakteristiska röda färgen, medan allt som inte är syrabeständigt alkohol blir missfärgat och färgat blått..
- Modifierad carbol fuchsin.
- Alkohol-syra.
- Metylenblå.
- Grundläggande fuchsin: 4 gr.
- Fenol: 8 ml.
- Alkohol (95%): 20 ml.
- Destillerat vatten: 100 ml.
Det grundläggande fuchsinet bör lösas långsamt i alkoholen och blandas hela tiden. Därefter smälts den kristalliserade fenolen i ett vattenbad vid 56 ° C. Efter upplösning tillsätts 8 ml till fuchsinlösningen som framställts ovan.
- Koncentrerad saltsyra: 3 ml.
- Etanol (95%): 97 ml.
Det måste mätas, sammanfogas och blandas.
- Metylenblått: 0,3 g.
- Destillerat vatten: 100 ml.
Den vägs och upplöses.
1- Förbered ett utstryk direkt från provet, som kan vara sputum, lungvätska, urinsediment, cerebrospinalvätska eller avföring; eller från en suspension av mikroorganismer erhållna från rena kolonier utvecklade i primära odlingsmedier.
2- Fäst utstryk med värme.
3- Placera utstryk på färgningsbryggan och täck med det beredda Kinyoun carbol-fuchsinreagenset. Låt det vila i 3 eller 5 minuter.
4- Tvätta med destillerat vatten.
5- Blek med sur alkohol i 3 minuter och tvätta igen med destillerat vatten.
6- Bleka igen med syraalkohol i 1 eller 2 minuter tills inget mer färgämne transporteras bort.
7- Tvätta med destillerat vatten och låt rinna av och placera objektglaset i vertikalt läge.
8- Täck beredningen med metylenblått och låt verka i 4 minuter.
9- Tvätta med destillerat vatten och låt lufttorka.
10- Undersök vid 40X och sedan vid 100X.
Om du vill förbättra och påskynda färgningen av syrafasta mikroorganismer, tillsätt 1 droppe vätmedel (t.ex. Tergitol nr 7) till 30 eller 40 ml Kinyoun Carbol Fuchsin.
Vissa laboratorier förändrar metylenblått kontrastfärg till ljusgrön eller pikrinsyra; den första ger en grön färg till bakgrunden och den andra genererar en gul färg.
För att förbättra färgningen av bakterier av släktet Nocardia används en modifiering av Kinyoun-fläcken. Tekniken är som följer:
1- Täck utstryk med Kinyoun carbol fuchsin i 3 minuter.
2- Tvätta med destillerat vatten.
3 - Missfärgas kort med sur alkohol beredd med 3% tills ingen färgning mer bärs.
4- Tvätta igen med destillerat vatten.
5- Täck beredningen med metylenblått och låt stå i 30 sekunder.
6- Tvätta med destillerat vatten och låt lufttorka.
Denna teknik rekommenderas för analys av avföringsprover för coccidia och sporer av Microsporidium sp på samma gång. Förfarandet som ska följas är som följer:
1- Täck utstryk med Kinyoun carbol fuchsin i 10 minuter.
2- Ta bort färgämnet och tvätta med destillerat vatten.
3- Blek i 30 sekunder med saltsyraalkohol.
4- Tvätta igen med destillerat vatten.
5- Täck utstryk med trikromlösning i 30 minuter vid 37 ° C.
6- Tvätta med destillerat vatten.
7- Blek i 10 sekunder med ättiksyraalkohol.
8- Tvätta utstrykningen i 30 sekunder med 95% etanol.
Som en positiv kontroll bereds utstryk med stammar av Mycobacterium tuberculosis och fläckar med de beredda reagenserna för att verifiera att bakterierna får rätt färg (röd-fuchsia).
Negativa kontroller kan också användas för att förbereda utstryk med vilken stam som helst som inte är syrafast, vilket verifierar att hela provet får den kontrasterande färgen..
Kinyoun-tekniken är enklare eftersom den eliminerar uppvärmningssteget, men dess främsta fördel är att den undviker utsläpp av ångor, mycket giftiga och cancerframkallande på lång sikt. Därför är Kinyoun-fläcken säkrare för färgningspersonal..
Det är viktigt att ta hänsyn till att man måste vara försiktig så att reagenserna inte kommer i direkt kontakt med huden, eftersom de är frätande och blekmedlet är brandfarligt..
När det gäller nackdelarna indikerar ett negativt utstrykning inte nödvändigtvis att organismen inte är närvarande. Dessutom kan närvaron av cellulärt skräp leda till falska positiva effekter, vilket leder till förvirring i diagnosen..
Ingen har kommenterat den här artikeln än.