De blodagar det är ett anrikat, differentiellt men icke-selektivt fast odlingsmedium. Det används för återvinning och tillväxt av ett stort antal mikroorganismer från kliniska prover eller för subkulturer..
Klassisk blodagar bör inkluderas för sådd av de flesta kliniska prover som tas emot i laboratoriet; med undantag för avföringsprover där det inte är användbart, såvida det inte är berett med vissa modifieringar.
Detta odlingsmedium består i grunden av en berikad basagar och 5% blod. Agarbasen kan variera beroende på behoven, men den kommer huvudsakligen att bestå av bland annat peptoner, aminosyror, vitaminer, köttextrakt, natriumklorid, agar..
När det gäller blod krävs normalt att ha kontakt med ett vivarium för att få blod från djur, såsom får, kanin eller häst. Detta är dock inte alltid möjligt och humant blod används ibland..
Blodagarmedium kan beredas i laboratoriet eller kan köpas färdigt från dedikerade företag. Beredningen av detta medium är en av de mest känsliga, all slarv i dess beredning kommer att resultera i en kontaminerad sats.
Det är därför som alla möjliga försiktighetsåtgärder måste vidtas och i slutändan måste en kvalitetskontroll utföras som inkuberar vid 37 ° C 1 platta för varje 100 som bereds.
Artikelindex
Blodagar är ett anrikat medium eftersom det innehåller 5-10% blod på en agarbas som dess huvudsakliga tillsats. Båda föreningarna innehåller många näringsämnen och den här egenskapen tillåter de flesta odlingsbara bakterier att växa i den..
Denna tillväxt sker utan begränsning; av den anledningen är det icke-selektivt. Men om föreningar tillsätts till detta medium som förhindrar tillväxt av vissa mikroorganismer och gynnar andra, blir det selektivt. Detta är fallet om vissa typer av antibiotika eller svampdödande medel tillsätts.
På samma sätt är blodagar ett differentiellt medium, eftersom det gör det möjligt för oss att skilja på tre typer av bakterier: beta-hemolytisk, alfa-hemolytisk och gamma-hemolytisk..
Betahemolytika är sådana som har förmågan att helt lysera eller bryta röda blodkroppar och bilda en klar halo runt kolonierna, därför producerar de ß eller ß-hemolys och mikroorganismerna kallas ß-hemolytika..
Exempel på ß-hemolytiska bakterier är Streptococcus pyogenes Y Streptococcus agalactiae.
Alpha-hemolytics är sådana som utför partiell hemolys, där hemoglobin oxideras till methemoglobin, vilket ger en grönaktig färg runt kolonierna. Detta fenomen är känt som α-hemolys eller α-hemolys och bakterier klassificeras som α-hemolytiska..
Exempel på a-hemolytiska bakterier är Streptococcus pneumoniae Y Streptokock av gruppen viridans.
Slutligen finns det så kallade gamma-hemolytiska eller icke-hemolytiska bakterier. Dessa växer på agaren utan att skapa förändringar på den, en effekt som kallas γ-hemolys, och mikroorganismerna är γ-hemolytiska.
Exempel på y-hemolytiska bakterier: vissa stammar av grupp D Streptococcus (Streptococcus bovis och Enterococcus faecalis).
Blodagarodlingsmediet är ett av de vanligaste i mikrobiologilaboratoriet..
Bland de mikroorganismer som kan växa i blodagarmediet är: stränga aeroba, fakultativa, mikroaerofila, anaeroba, grampositiva eller gramnegativa bakterier, snabbt växande eller långsamt växande bakterier.
Vissa näringskrävande eller kräsna bakterier växer också, såväl som svampar och jäst. På samma sätt är det användbart att utföra subkulturer eller återaktivera stammar som är metaboliskt mycket svaga..
Valet av blodtyp och basagar varierar emellertid beroende på den troliga mikroorganismen som misstänks ha återhämtat sig och användningen som kommer att ges till plattan (odling eller antibiogram)..
Blod kan vara lamm, kanin, häst eller människa.
Det mest rekommenderade är lammblod, med några undantag. Till exempel att isolera Haemophilus-arter, där det rekommenderade blodet är häst- eller kaninblod, eftersom lammblod har enzymer som hämmar faktor V.
Den minst rekommenderade är mänsklig, men den är den mest använda, kanske för att den är lättast att få.
Blodet måste defibrineras, erhållas utan någon typ av tillsatsmedel och från friska djur. För användning av humant blod måste flera faktorer beaktas:
Om blodet kommer från individer som har haft bakterieinfektioner kommer de att ha specifika antikroppar. Under dessa förhållanden kommer tillväxten av vissa bakterier sannolikt att hämmas..
Om det erhålls från blodbanken innehåller det citrat och vissa bakterier kanske inte växer i dess närvaro. Å andra sidan, om blodet kommer från patienter som tar antibiotika, kan tillväxten av mottagliga bakterier hämmas..
Och om blodet kommer från en diabetesperson stör överskott av glukos den rätta utvecklingen av hemolysmönster.
Basagaren som används för framställning av blodagar kan vara mycket bred. Bland dem finns: näringsagar, hjärninfusionsagar, tryptikassojagar, Müeller Hinton-agar, Thayer Martin-agar, Columbia-agar, Brucella-agar, Campylobacter-agar etc..
Denna bas är den minst använda, eftersom den huvudsakligen kommer att odla icke-krävande bakterier, såsom enteriska baciller., Pseudomonas sp, S. aureus, Bacillus sp, bland andra. Det rekommenderas inte att isolera Streptococcus.
Det är en av de mest använda som en blodagarbas, eftersom den har nödvändiga näringsämnen för tillväxt av de flesta bakterier, inklusive Streptococcus sp och andra snabba bakterier. Även om det inte är lämpligt för att observera mönster av hemolys.
Lammblod används vanligtvis med denna bas.
Blodagarvarianter kan också framställas där andra föreningar tillsätts för att isolera vissa mikroorganismer. Till exempel tjänar hjärninfusionsagar kompletterat med kaninblod, cystin och glukos till att isolera Francisella tularensis.
Medan cystintellurit är det användbart för isolering av Corynebacterium diphteriae. Mänskligt blod eller lammblod kan användas.
Med den första beta-hemolysen ses som en smal gloria, medan den andra kommer att vara mycket bredare.
På samma sätt används denna bas tillsammans med bacitracin, majsstärkelse, hästblod och andra anrikningstillskott (IsoVitaleX) för isolering av släktet Haemophilus sp från andningsprover.
Om kombinationen av antibiotika kloramfenikol - gentamicin eller penicillin - streptomycin med hästblod tillsätts, är det också idealiskt för isolering av krävande patogena svampar, även med ett högre utbyte än Sabouraud glukosagar. Det är särskilt användbart vid isolering Histoplasma capsulatum.
Denna bas är den mest rekommenderade för en bättre observation av hemolysmönstret och för att utföra diagnostiska tester som optokin taxa och bacitracin. Det är den klassiska blodagaren som används rutinmässigt.
Med denna bas kan du också förbereda den speciella blodagaren för Corynebacterium diphteriae, med cystintellurit Y lammets blod.
På samma sätt är kombinationen av denna agar med lammblod, plus kanamycin-vancomycin perfekt för tillväxt av anaerober, särskilt Bacteroides sp.
Denna bas kompletterad med blod används för att utföra antibiogram av krävande mikroorganismer, såsom Streptococcus sp.
Det är också användbart för isolering av bakterier såsom Legionella pneumophila.
Detta medium är idealiskt som en bas för blodagar när man misstänker släktet Neisseria, särskilt Neisseria meningitidis, som N. gonorrhoeae växer inte på blodagar.
Det används också för att utföra känslighetstester för Neisseria meningitidis.
Denna bas är utmärkt för sådd av gastriska biopsiprover för Helicobacter pylori.
Mediet framställs genom tillsats av 7% lammblod defibrinerat med antibiotika (vankomycin, trimetoprim, amfotericin B och cefsulodin) för att begränsa tillväxten av andra typer av bakterier som kan vara närvarande..
Samma bas kompletterad med humant blod eller lammblod, nalidixinsyra och kolistin är användbart att isolera Gardnerella vaginalis. Perfekt för att bedöma antimikrobiell känslighet för antibiotika av samma mikroorganism.
Dessutom används den för beredning av blodagar för odling av anaerober, tillsats av aminoglykosider och vankomycin..
Denna bas låter dig korrekt observera hemolysmönstren.
Detta medium som används som bas för blodagar tillsammans med tillsats av vitamin K är perfekt för odling av anaeroba bakterier. I detta fall rekommenderas användning av lammblod..
Campylobacter-agar kompletterat med 5% fårblod och 5 antibiotika (cefalotin, amfotericin B, trimetoprim, polymyxin B och vancomycin) är det medium som används för att isolera Campylobacter jejuni i avföringsprover.
Varje kommersiellt hus innehåller instruktioner för att förbereda en liter odlingsmedium på baksidan av behållaren. Motsvarande beräkningar kan göras för att förbereda önskad mängd, beroende på vald basagar.
Basagaren är uttorkad (pulver), därför måste den lösas i destillerat vatten justerat till pH 7,3.
Mängden som indikeras av den valda basagaren vägs och löses i motsvarande mängd vatten i en kolv, upphettas sedan över måttlig värme och blandas med rotationsrörelser tills allt pulver är upplöst..
När den väl är upplöst steriliseras den i en autoklav vid 121 ° C i 20 minuter.
När man lämnar autoklaven får kolven svalna tills temperaturen svänger mellan 40 och 50 ° C; Det är en temperatur som den mänskliga huden stöder och samtidigt har agaren ännu inte stelnat.
För att göra detta berörs kolven med handen och om värmen är acceptabel är det den perfekta temperaturen att tillsätta motsvarande mängd defibrinerat blod (50 ml för varje liter agar). Blanda försiktigt för att homogenisera.
Blodaggregeringens passage är avgörande, för om det görs när mediet är mycket varmt kommer de röda blodkropparna att brytas ner och mediet kommer inte att tjäna till att observera hemolys.
Om det tillsätts för kallt kommer klumpar att bildas och ytan på mediet blir inte slät för att möjliggöra korrekt poäng..
Servera i sterila petriskålar omedelbart efter homogenisering av blodet. Cirka 20 ml hälls i varje petriskål. Denna procedur utförs i en laminär fläktkåpa eller nära brännaren.
När du serverar blodagaren i petriskålarna bör inga luftbubblor finnas kvar på plattans yta. Om detta händer passerar Bunsen-brännarens flamma snabbt över plattan för att eliminera dem..
Plattorna får stelna och förvaras i kylskåp (2-8 ° C) inverterade tills de används. Innan du använder blodagarplattorna måste de härdas (får rumstemperatur) för att kunna sås..
De beredda tallrikarna varar cirka 1 vecka.
Ingen har kommenterat den här artikeln än.