De Thayer Martin agar är ett mycket näringsrikt och selektivt fast medium för isolering av Neisseria meningitidis och Neisseria gonorrhoeae; båda kända som patogena eller kliniskt viktiga Neisserias.
En av de viktigaste speciella egenskaperna hos Thayer Martin Agar är dess höga innehåll av näringstillskott. Denna egenskap är viktig, eftersom Neisserias är mycket krävande mikroorganismer ur näringssynpunkt och därför inte växer i vanliga medier..
Å andra sidan, eftersom dessa mikroorganismer normalt finns i icke-sterila områden, är det nödvändigt att tillsätta hämmare som förhindrar tillväxten av den medföljande floran, utan att påverka utvecklingen av Neisseria-släktet..
Denna agar består av GC-basagar, hemoglobin, ytterligare näringstillskott och ett komplex av hämmande ämnen (antibiotika och svampdödande medel). Kommersiella hus säljer varje tillägg separat.
Provet som ska sås i detta medium beror på den mikroorganism som eftersträvas. För att Neisseria gonorréer ideala prover är vaginala och urinrörsutsöndringar. Medan för Neisseria meningitidis de mest använda proverna är CSF, faryngeal och nasopharyngeal exsudat.
Artikelindex
Neisserias är mikroorganismer som klassificeras som irriterande och därför är deras isolering svår. Av denna anledning är Thayer Martín ett komplext medium och var och en av dess komponenter uppfyller en funktion som förklaras nedan:
GC-agar innehåller proteospepton, majsstärkelse, natriumklorid, dikaliumfosfat, monokaliumfosfat och agar-agar. Dess komponenter ger de grundläggande näringsämnena för mikrobiell utveckling, neutraliserar toxiska fettsyror, hjälper till att upprätthålla osmotisk balans, definierar pH och ger solid konsistens till mediet..
Hemoglobin ger faktorer V och X (nikotinamidadenindinukleotid NAD respektive hemin). Av denna anledning växer också Haemophilus-arter i detta medium. Hemoglobin kan erhållas kommersiellt i en uttorkad form eller färskt defibrinerat nötkreaturblod kan tillsättas till mediet..
Å andra sidan måste ett anrikningstillskott också tillsättas Thayer-Martin-mediet, eftersom näringsämnena i basagaren inte är tillräckliga för kraven i Neisseria-släktet..
Det vanligaste anrikningstillägget kallas isovitalex. Den innehåller glutamin, adenin, NAD, kokarboxylas, guanin, järnnitrat, p-amino bensoesyra, vitamin B12, tiamin och glukos. Alla dessa föreningar är nödvändiga för korrekt utveckling av patogena Neisserias.
Eftersom det är ett mycket näringsrikt medium måste hämmare användas som förhindrar tillväxt av mikroorganismer i den vanliga floran i området och därmed gynnar isoleringen av Neisseria-släktet..
Inhibitorkomplexet består av vankomycin, kolistin och nystatin. Vancomycin hämmar tillväxten av Gram-positiva bakterier, kolistin förhindrar tillväxten av Gram-negativa bakterier såsom Pseudomonas och vissa saprofytiska Neisserias, och nystatin verkar på jäst som Candida albicans.
Men Thayer Martin Agar ändrades senare; förändringarna bestod av tillsatsen av trimetoprim, ökningen av mängden agar och tillsatsen av extra glukos. Dessa förändringar förbättrade avsevärt återhämtningen av arter av Neisseria gonorrhoeae.
Det bör noteras att trimetoprim hämmar tillväxten av släktet Proteus och dess därav följande svärmande bildning. I den meningen är antibiotika de som ger Thayer Martin-mediet den selektiva karaktären.
Väg upp 8,2 g uttorkat GC-medium och suspendera i 100 ml. Blanda och koka i 1 minut med ofta omrörning för att lösa upp helt. Sterilisera blandningen i en autoklav vid 121 ° C i 15 minuter.
Suspendera 2 g uttorkat hemoglobin i 2 eller 3 ml hett destillerat vatten tills en enhetlig blandning bildas. Tillsätt mer vatten lite efter lite för att göra en volym på 100 ml. Suspensionen måste vara homogen före sterilisering.
Sterilisera i autoklav i 15 minuter.
Bered den kommersiella injektionsflaskan med utspädningsmedlet från samma kommersiella företag. Blanda väl. Mängden utspädningsmedel som ska användas kommer att anges i satsinstruktionerna..
Bered flaskan med utspädningsmedlet från det kommersiella företaget. Blanda väl. Mängden utspädningsmedel som ska användas kommer att specificeras i instruktionerna för satsen..
Gör så här för varje 100 ml GC-agar:
När GC-agaren lämnar autoklaven, låt den svalna till en temperatur av cirka 50 ° C och tillsätt 2 ml av den beredda hemoglobinlösningen, 2 ml av anrikningstillägget (isobitalex eller britalex) och 2 ml av hämningstillägget. Blanda och servera i sterila petriskålar..
Låt stelna och förvara i kylskåp tills det används.
Färgen på det beredda mediet är körsbärsrött. Mediets slutliga pH är 7,2 ± 0,2
Väg upp 8,2 g uttorkat GC-medium och suspendera i 100 ml. Tillsätt 1 g agar-agar och tillsätt 0,3 g glukos. Blanda och koka i 1 minut med ofta omrörning för att lösa upp helt. Sterilisera blandningen i en autoklav vid 121 ° C i 15 minuter.
Förbered hemoglobinet och anrikningstillägget enligt beskrivningen ovan.
Det använda hämningstillägget är V.C.N.T (vankomycin, kolistin, nystatin, trimetoprim).
Fortsätt enligt beskrivningen för den ursprungliga Thayer Martin-agaren.
Thayer Martin Agar bör tillåtas värmas innan proverna strimmas. Vanligt förekommande prover är svalpinnar, nässvampar, vaginal, urinrörs- och / eller rektal urladdning och CSF..
Använd färska prover och gör starka ympningar på agaren. Proverna sås direkt genom materialutsläpp och sedan uttömmande strimmor på ytan.
Plattorna inkuberades vid 35-37 ° C under 24 till 48 timmar i en mikroaerofil burk (5% COtvå). I slutet av inkubationstiden undersöks plattorna med avseende på små kolonier, gråa och ibland slemhinna..
Utför Gram och bekräftande biokemiska tester på misstänkta kolonier.
Följande mikrobiella stammar kan användas för att utföra kvalitetskontroll på Thayer Martin Agar.
Neisseria gonorrhoeae ATCC 49226 och Neisseria meningitidis ATCC 13090; tillfredsställande utveckling förväntas i båda stammarna.
Följande stammar bör också inkluderas: Staphylococcus epidermidis ATCC 14990, Escherichia coli ATCC 25922, Proteus mirabilis ATCC 43071 och Candida albicans ATCC 10231. I alla av dem förväntas en total eller partiell hämning i detta medium..
-Man måste komma ihåg att bakterier som är resistenta mot de hämmare som används kan växa i mediet.
-Det finns stammar av Neisseria gonorréer som kan vara känsliga för koncentrationen av vankomycin som används. Av denna anledning rekommenderas att du använder chokladagar kompletterat med isovitalex, men utan hämmare..
-Det finns nystatinresistenta jäststammar som kan växa i detta medium och störa isoleringen av patogena Neisserias, särskilt gonokocker..
Ingen har kommenterat den här artikeln än.