De TSI-agar o Triple Sugar Iron Agar är ett fast odlingsmedium som fungerar som ett biokemiskt test för att styra den initiala identifieringen av gramnegativa baciller. Den är baserad på att visa jäsning av det närvarande sockret och produktionen av vätesulfid och gas.
Dess sammansättning och bas är mycket lik Kligler-järntestet, med skillnaden att den senare endast innehåller glukos och laktos. Å andra sidan innehåller - som namnet antyder - trippel sockerjärnagar tre fermenterbara kolhydrater: glukos, laktos och sackaros..
Dessutom har TSI-mediet fyra proteinderivat som gör det till en mycket näringsrik agar: jästextrakt, köttextrakt, pepton och proteospepton. Innehåller även järn-ammoniumsulfat, natriumtiosulfat, natriumklorid, fenolrött och agar.
Oförmågan hos en mikroorganism att jäsa glukosen som finns i mediet utesluter omedelbart att den tillhör Enterobacteriaceae-familjen. Därför är detta test viktigt för att bestämma vilken identifieringsväg som ska följas för att bestämma släktet och arten..
Varje laboratorium bestämmer om de ska arbeta med TSI-agar eller med Kliglers järnagar..
Artikelindex
Var och en av föreningarna uppfyller en funktion inom mediet.
Natriumklorid är nödvändigt för att bibehålla den osmotiska balansen i mediet. Medan agaren ger den en solid konsistens.
PH i det beredda mediet balanseras vid 7,3 och pH-indikatorn (fenolröd) blir gul under 6,8. Detta innebär att små mängder syror som produceras genom jäsning av sockerarter förvandlar mediet från röd-orange till gult..
Om jäsning inte sker kommer alkalisering av mediet att ske genom användning av peptoner, som förvandlas från röd-orange till starkröd.
När bakterier metaboliserar proteinerna som finns i TSI-agar, produceras aminer som alkaliserar mediet (främst på fasnivån), eftersom reaktionen kräver syre. Aminerna gör ramen ljusröd.
Men detta beror på bakteriens förmåga att jäsa kolhydrater eller inte..
Studien av jäsning av sockerarter kan ge flera bilder och var och en tolkas olika. Testtolkningen delar upp mikroorganismer i tre kategorier: glukos-icke-jäser, laktos-jäser och laktos / sackarosjäser..
Det bör noteras att mängden glukos i mediet är begränsad, medan koncentrationen av laktos och sackaros är 10 gånger högre..
Bakterier av Enterobacteriaceae-familjen och andra glukosjäsmikroorganismer kommer att börja jäsa detta socker eftersom det är den enklaste kolhydraten för energi..
Å andra sidan är laktos och sackaros komplexa kolhydrater som måste brytas ned och omvandlas till glukos för att de ska kunna komma in i Embden-Meyerhof-cykeln..
När den inokulerade mikroorganismen inte kan jäsa glukos kommer mycket mindre att kunna jäsa andra kolhydrater. Därför bildas inga syror här, men det bildas aminer i fasningen på grund av användningen av peptoner.
I det här fallet blir ramen en starkare röd och rörets botten kan förbli oförändrad eller så kan den också vara alkaliserad och lämna hela röret rött..
Tolkning: K / K betyder alkalisk fas / alkalisk eller neutral botten
Se bilden i röret i början av artikeln.
Detta resultat indikerar att mikroorganismen inte tillhör familjen Enterobacteriaceae..
Om bakterierna kan jäsa glukos men inte laktos eller sackaros, kommer följande att hända:
Bakterierna konsumerar all glukos som är närvarande efter cirka 6 till 8 timmar och kan försura både fas och blocket. agaren har blivit helt gul. Men när glukosen är utarmad och oförmågan att använda laktos och sackaros, kommer bakterierna att börja metabolismen av proteiner.
Denna reaktion behöver syre, därför sker nedbrytningen av peptoner på ytan (fasning). De producerade aminerna alkaliserar ramen från gul till röd. Denna reaktion framgår efter 18 till 24 timmars inkubation..
Tolkning: K / A betyder alkalisk fasning och syra.
I bilden i början av artikeln se bilden av rör B.
Mikroorganismer som kan jäsa laktos och sackaros kan uppenbarligen jäsa glukos. Efter att den minsta mängden glukos som finns i mediet har förbrukats börjar det bildade pyruvatet att metabolisera för att bilda syror genom den aeroba Krebs-cykeln, och under perioden 8 till 12 timmar blir allt medium gult.
Om bakterierna kan bryta ner laktos eller sackaros kommer syror att fortsätta att produceras och efter 18 till 24 timmar fortsätter hela röret - fasning och plugg - att gulna.
Det bör noteras att användningen av glukos utförs på två sätt: ett aerobt vid rörets fas och det andra anaerobt i botten av röret..
Tolkning: A / A betyder syra fas / syrabot. Kan eller kanske inte presentera gas.
Se bilden i röret i början av artikeln.
Vissa mikroorganismer kan producera gas under jäsning av sockerarter. Gasen framgår av röret genom trycket som det utövar i agaren. Trycket orsakar bubblor eller agarens förskjutning. Ibland kan gasbildningen bryta mediet.
Det är viktigt att punkteringen görs rent genom mitten av agaren när den sår TSI-mediet tills den når botten. Om punkteringen avleds mot rörets väggar kan det orsaka falska positiva effekter i gasproduktionen, eftersom den kommer att fly genom den felaktiga kanalen.
Gasproduktionen, liksom reaktionerna som uppträder i agarfasningen, behöver syre, därför rekommenderas det att röret täcks med en bomullsplugg, och om en bakelitlock används ska den inte vara helt tät..
Gasproduktion rapporteras som positiv (+) eller negativ (-).
Bakterier som kan producera vätesulfid (färglös gas) tar upp svavlet från natriumtiosulfat som finns i mediet. När HtvåS reagerar med järnammoniumsulfat och producerar järnsulfid (tydligt synlig svart fällning).
Produktionen av HtvåS rapporteras som positiv (+) eller negativ (-).
I bilden i början av artikeln se bilden av rör C.
Väg 62,5 g av det uttorkade mediet för trippel sockerjärnagar (TSI) och lös det i en liter destillerat vatten..
Värm tills agaren är helt upplöst. Koka i en minut, rör om ofta. Fördela 4 ml av mediet i 13/100 provrör med bomullslock.
Sterilisera i en autoklav vid 121 ° C i 15 minuter. Ta bort den från autoklaven och låt den vila i en vinkel. Man måste se till att både basen och ramen har samma avstånd.
Förvara i kylskåp 2-8 ° C. Låt det värmas innan bakteriestammen sås.
Färgen på det uttorkade mediet är ljusbeige och det beredda mediet är rödorange.
Det slutliga pH-värdet för det beredda mediet är 7,3 ± 0,2.
TSI-testet används ofta på mikrobiologisk laboratorium. Detta test är viktigt för att styra vilken typ av test som måste tillämpas för att identifiera släktet och arten. Dess goda utförande och tolkning kan spara material och arbete.
Om resultatet är en TSI K / K och testet för cytokromoxidas är positivt, är det känt att tester bör användas för identifiering av icke-jäsande gramnegativa stavar, såsom Pseudomonas, Alcaligenes, Achromobacter, Burkholderia, bland andra släktingar. Om det är oxidasnegativt, är det riktat mot släktena Acinetobacter, Stenotrophomonas, etc..
Å andra sidan, om en TSI A / A eller K / A erhålls och cytokromoxidas-testet är negativt, desto mer nitrater minskar till nitriter, kommer vi att vara säkra på att det är en mikroorganism som tillhör Enterobacteriaceae-familjen. I detta fall kommer identifieringsvägen att fokusera på specifika tester för denna grupp av bakterier..
Å andra sidan, om en K / A- eller A / A-bild erhålls och cytokromoxidas-testet är positivt, kommer de ytterligare testerna att monteras inriktade på identifiering av jäsande stammar som inte tillhör Enterobacteriaceae-familjen, såsom som: Aeromonas, Plesiomonas, Vibrio och Pasteurella.
En TSI med vätesulfid, oxidasnegativ, kommer att vägleda identifieringen av följande släktingar av Enterobacteriaceae-familjen: Proteus, Citrobacter, Edwardsiella, Leminorella, Pragia, Trabusiella eller Salmonella.
En TSD med liten eller måttlig vätesulfid i den alkaliska fasningen med en alkalisk bakgrund och ett positivt oxidas, kommer att vägleda användningen av tester för identifiering av icke-jäsande gramnegativa baciller som producerar HtvåJa, precis som Shewanella putrefaciens.
Slutligen kan TSD användas för undersökning av vätesulfidproduktion i grampositiva basiller, särskilt när det misstänks Erysipelothrix rhusiopathiae.
TSI-mediet måste inokuleras med rena kolonier, isoleras i primära eller selektiva kulturer. Om kolonin tas från selektiva medier som såddes ut med prover med blandad flora, bör försiktighet tas endast från ytan, eftersom livskraftiga stammar som inhiberas i det mediet kan finnas i den nedre delen av kolonin..
Därför bör slingan aldrig kylas på ett selektivt medium för att senare ta kolonin och inokulera ett TSI-medium..
Såningen kommer att göras med en rak slinga eller nål. En punktering kommer att göras, var noga med att den är genom mitten av mitten tills den når botten, och sedan avslutas sådd genom ympning av ytan i en sicksackform. Gör inte två punkteringar.
Inkubera vid 37 ° C i aerobios under 18-24 timmar. Tolk i denna tid, varken före eller efter.
TSI-testet bör läsas inom 18 till 24 timmar efter inkubation. En avläsning före denna tid kan ge en falsk positiv för A / A-jäsning. Medan en avläsning efter denna tid kan ge upphov till en falsk negativ bild av en icke-jäser, på grund av konsumtionen av peptoner som alkaliserar mediet..
Ingen har kommenterat den här artikeln än.