De Vogel-Johnson agar är ett fast, selektivt och differentierat odlingsmedium, speciellt formulerat för isolering av Staphylococcus aureus. Detta medium skapades av Vogel och Johnson 1960 från modifieringen av tellurit glycinagar formulerad 1955 av Zebovitz, Evans och Niven..
Modifieringen bestod i att öka koncentrationen av mannitol närvarande i mediet och i införlivandet av en pH-indikator. Den nuvarande formeln består av triptein, jästextrakt, mannitol, dikaliumfosfat, litiumklorid, glycin, fenolrött, agar, 1% kaliumtelluritlösning och vatten..
Det bör noteras att det finns andra medier som, precis som Vogel-Johnson agar, är selektiva för isolering av S. aureus, såsom salt mannitolagar och Baird Parker-agar. I den meningen kan man säga att grunden till Vogel-Johnson-agar är en blandning mellan salt mannitolagar och Baird Parker-agar..
I den första kolonierna av S. aureus De kännetecknas av att jäsa mannitolen och göra pH-indikatorn gul. Å andra sidan, i den andra den S. aureus det kännetecknas av att reducera tellurit till tellur och bilda grå till svarta kolonier. Båda egenskaperna observeras i Vogel-Johnson-agar..
Detta medium, liksom dess motsvarigheter, är användbart för detektering av Staphylococcus aureus i livsmedelsprover, hygienkontroller av industriprodukter och i kliniska prover.
Artikelindex
Vogel-Johnson medium innehåller triptein och jästextrakt; Båda ämnena ger långkedjiga aminosyror som fungerar som källor för kol och kväve som är nödvändiga för bakterietillväxt. Bakterier som kan växa i detta medium tar näringsämnena från dessa ämnen..
Vogel-Johnson-agar kan hämma tillväxten av gramnegativa bakterier och till och med vissa gram-positiva bakterier, vilket gynnar utvecklingen av koagulaspositiva stafylokocker. De hämmande substanserna är kaliumtellurit, litiumklorid och glycin..
De ämnen som gör detta differentiella medium är mannitol och kaliumtellurit. Mannitol är ett kolhydrat, och när det fermenteras produceras syror som gör att mediet blir från rött till gult, vilket händer tack vare närvaron av den röda fenolens pH-indikator..
Den färglösa telluriten, när den reduceras till fritt metall tellur, tar en mörkgrå till svart färg..
De Staphylococcus aureus jäser mannitol och reducerar tellurit till tellur. Det är därför de typiska kolonierna i S. aureus i detta medium är de grå eller svarta omgivna av ett gult medium.
Bakterier som växer i detta medium och inte reducerar tellurit eller ferment mannitol, kommer att bilda transparenta kolonier omgivna av ett rött färgat medium, ännu mer intensivt än den ursprungliga färgen, på grund av alkaliseringen av mediet genom användning av peptoner.
Å andra sidan kommer bakterier som minskar tellurit men inte jäser mannitol att växa som grå eller svarta kolonier omgivna av ett djuprött medium..
Om mediet bereddes utan tillsats av kaliumtellurit, kolonier av S. aureus skulle utvecklas som gula kolonier, omgivna av ett gult medium, som i salt mannitolagar.
Dikaliumfosfat upprätthåller den osmotiska balansen i mediet och justerar pH till neutralitet 7.2. Medan agar ger odlingsmediet en solid konsistens.
Denna lösning ingår inte i det uttorkade mediet, eftersom det inte kan steriliseras i en autoklav. Av denna anledning bereds den separat och tillsätts till det redan steriliserade mediet..
Vissa kommersiella hus säljer den färdiga 1% kaliumtelluritlösningen. Gör så här om du vill förbereda dig i laboratoriet:
Väg upp 1,0 g kaliumtellurit och mät 100 ml destillerat vatten. Lös kaliumtelluriten i en del vatten och slutför sedan mängden vatten tills den når 100 ml. Sterilisera lösningen med filtreringsmetod.
Väg 60 g av det uttorkade mediet och lös upp det i 1 liter destillerat vatten. Blandningen upphettas till koka för att underlätta fullständig upplösning. Under upplösningsprocessen omrörs mediet ofta.
Sterilisera i autoklav vid 15 pund tryck och 121 ° C i 15 minuter. Ta bort den från autoklaven och låt den vila tills mediet når en temperatur på cirka 45 till 50 ° C. Tillsätt 20 ml av den tidigare beredda 1% kaliumtelluritlösningen.
Blanda och häll i sterila petriskålar. Låt stelna och beställ inverterad på tallrikshållare för att senare förvaras i kylen tills den används.
Det slutliga pH-värdet för det beredda mediet måste vara 7,2 ± 0,2.
Innan du sår ett prov, vänta tills plattan når rumstemperatur..
Färgen på det beredda mediet är rött.
Även om det kan användas för isolering av S. aureus i alla typer av prover används den huvudsakligen för mikrobiologisk analys av farmaceutiska produkter, kosmetika och livsmedel.
Det rekommenderas att inokulatet är tätt. Såning kan göras genom avdragning med ett platinahandtag eller med ytan med en Drigalski-spatel.
Plattorna inkuberas vid 35-37 ° C under 24 till 48 timmar i aerobios.
Följande kontrollstammar kan användas för att utföra kvalitetskontroll på Vogel-Johnson-mediet:
Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 eller Proteus mirabilis ATCC 43071.
Det förväntade resultatet är följande: för stammar av S. aureus Tillfredsställande tillväxt med svarta kolonier omgivna av gult medium. För att S. epidermidis regelbunden tillväxt med genomskinliga eller svarta kolonier omgivna av rött medium.
Likaså för E coli total hämning förväntas, och för Proteus mirabilis partiell eller total hämning; om den växer kommer den att göra det sparsamt och kolonierna kommer att vara svarta omgivna av den röda halvan.
Ingen har kommenterat den här artikeln än.