De peptonvatten Det är ett flytande, icke-selektivt anrikningsmedium, som främst används som ett utspädningsmedel för prover av mat eller andra material. Detta medium ur kemisk synvinkel är mycket enkelt, det innehåller köttpepton, natriumklorid och vatten..
Det har ett visst näringsvärde, vilket gör att provet kan berikas. Om det finns missbrukade bakterier har detta medium makten att reparera livskraft. Det är särskilt användbart vid återhämtning av bakterier som tillhör Enterobacteriaceae-familjen..
I fallet med återvinning av Salmonellas rekommenderas användning av varianten av buffrat peptonvatten; Detta fungerar som ett förberikningsmedium för provet, i det här fallet innehåller det andra element såsom dinatriumfosfat och dikaliumfosfat..
Normalt framställs peptonvatten vid neutralt pH, men det finns andra varianter där det är nödvändigt att pH är 8,5 ± 0,2 (alkaliskt), eftersom bakterien som ska isoleras är alkalisk, såsom Vibrio cholerae.
Dessutom kan detta medium användas som ett basmedium för kolhydratfermenteringstester..
Artikelindex
Peptoner ger de näringsämnen som krävs för bakterietillväxt, särskilt kväve och kortkedjiga aminosyror, medan natriumklorid bibehåller osmotisk balans..
Dessutom tillåter mediet att sprida, homogenisera och reparera bakterieceller som har skadats av industriella processer..
Som ett utspädningsmedel är det perfekt att effektivt ersätta fysiologisk lösning (SSF) eller fosfatbuffertlösning (PBS).
Bakterietillväxt är uppenbar genom att observera dess grumlighet..
Väg 1 g pepton och 8,5 g natriumklorid, lös upp i 1 liter destillerat vatten. PH bör justeras till 7,0. För detta kan 1 N natriumklorid användas..
Väg 15 g av det uttorkade mediet och lös upp det i en liter destillerat vatten. Homogenisera blandningen. Om det behövs kokas blandningen i 1 minut för att underlätta den totala upplösningen. Servera i 100 ml flaskor eller 10 ml rör efter behov. Autoklav vid 121 ° C i 15 minuter.
Kyl och använd eller förvara i kylskåp. Mediets slutliga pH är 7,2 ± 0,2.
Färgen på det uttorkade mediet är ljusbeige och det beredda mediet är ljust bärnstensfärgat.
Till den tidigare beredningen - före sterilisering - måste kolhydraten tillsättas till en slutkoncentration på 1% plus Andrade-indikatorn (syrafuchsin) eller fenolrött (0,018 g / L). Rören bör vara försedda med en Durham-klocka för att observera gasbildning.
Den innehåller enzymatiskt hydrolysat av kasein, natriumklorid, dihydrogenkaliumfosfat och natriumvätefosfatdodekahydrat. Slutligt pH är 7,0 ± 0,2.
Väg 20 g av det uttorkade mediet för att bereda det och lös det i 1 liter destillerat vatten. Låt den vila i cirka 5 minuter. Värm i 1 minut tills den är helt upplöst.
Häll i lämpliga burkar efter behov. Sterilisera med hjälp av autoklaven vid 121 ° C i 15 minuter.
Väg 25 g av det uttorkade mediet och lös upp i 1 liter vatten. Fortsätt enligt beskrivningen ovan. PH varierar från 8,3 till 8,7.
Inokulatet görs genom att placera provet direkt.
Det används för att späda prover, särskilt när man misstänker att det kan finnas skadade bakterier. Vanligtvis är utspädningarna 1:10 och 1: 100.
Inkubera i 24 timmar i aerobios vid 35-37 ° C.
För avföringsprover som letar efter Salmonella rekommenderas användning av buffrat eller buffrat vatten som ett förberikningsmedium..
Gör så här:
Om avföringen bildas, ta 1 g prov. Om de är flytande, ta 1 ml avföring och upphäng i ett rör med 10 ml buffrat peptonvatten. För rektala svabbar, släpp ut torkmaterialet i röret med buffrat peptonvatten.
Blanda och homogenisera provet i alla fall mycket bra..
Inkubera vid 37 ° C i 18 till 24 timmar. Därefter subkultur i en anrikningsbuljong såsom selenit cystinbuljong eller tetrationjonbuljong vid 37 ° C under 18-24 timmar mer. Slutligen odla i selektiva medier för Salmonella, såsom SS-agar, XLD-agar, Hektoen-agar, bland andra..
Peptonvatten används som ett anrikningsmedium eller som ett enkelt utspädningsmedel, men om man letar efter Salmonella-arter används det som ett föranrikningsmedium, som redan beskrivits..
Gör så här med mat:
Väg 25 g av provet för fasta livsmedel och 25 ml av det för flytande livsmedel. Placera nämnda del i kolvar som innehåller 225 ml peptonvatten. Blanda och homogenisera provet.
Om den mikrobiella belastningen misstänks vara hög kan serie- eller decimalutspädningar göras för att underlätta räkningen av kolonibildande enheter (CFU)..
Antalet utspädningar beror på typ av prov och analytikerns erfarenhet..
Om tvärtom misstänks att den mikrobiella belastningen är mycket låg, är det inte nödvändigt att utföra utspädningar. Därefter subkultur på selektiva medier.
När det gäller mat från havet, som skaldjur, fisk, bland andra, på jakt efter Vibrio cholerae eller andra Vibrio-arter bör peptonvatten justerat till pH 8,5 (alkaliskt peptonvatten) användas.
Från varje beredd sats ska ett till två rör inkuberas utan inokulering under 24 timmar i aerobios vid 37 ° C. I slutet av tiden bör ingen grumlighet eller färgförändring observeras.
Kända kontrollstammar kan också användas för att utvärdera deras effektivitet:
Följande bakteriestammar kan användas för detta: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 8927, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Salmonella typhimurium ATCC 1428, Salmonella enteritidis ATCC 13076.
I alla fall förväntas tillfredsställande mikrobiell utveckling, vilket observeras av mediumets grumlighet..
-Det uttorkade mediet är mycket hygroskopiskt, så det måste hållas borta från fukt.
-Mediet ska inte användas om någon typ av försämring observeras.
-Det uttorkade odlingsmediet bör förvaras mellan 10 - 35 ° C
-Det beredda mediet ska förvaras i kylskåp (2-8 ° C).
Ingen har kommenterat den här artikeln än.