De kapselfärgning är en differentiell färgningsteknik som har egenskapen att lyfta fram polysackaridstrukturen som omger vissa bakterier och jäst som kallas kapsel. Det används i kliniska laboratorier för att diagnostisera vissa patologier orsakade av kapslade mikroorganismer..
Det används också i undervisningslaboratorier för demonstration av denna morfologiska struktur för studenter inom hälsovetenskapskarriärer, såsom: medicin, bioanalys, omvårdnad eller cytoteknik, bland andra..
Det finns flera enkla tekniker för att visa närvaron av kapseln i mikroorganismerna som har den, dessa är: den negativa fläcken, Anthony-fläcken och en variant som kombinerar de två föregående.
Negativ färgning används främst i CSF-prover när man misstänker närvaro av jäst. Cryptococcus neoformans. Denna jäst är en vanlig orsak till hjärnhinneinflammation.
Denna teknik använder nigrosin eller Indien-bläck och är baserad på att skapa en kontrast mellan bakgrunden för beredningen och den ogenomträngliga kapseln i mikroorganismen. Bakgrunden blir mörk och kapseln är färglös. På detta sätt markeras denna struktur.
När det gäller Anthony-tekniken kan man säga att den mestadels används i undervisningslaboratorier för att demonstrera polysackaridstrukturen i bakterier som Klebsiella pneumoniae, Streptococcus pneumoniae Y Neisseria meningitidis.
Användningen av denna teknik för diagnostiska ändamål är mycket sällsynt, eftersom det finns andra rutinprov som möjliggör identifiering av dessa mikroorganismer..
Artikelindex
Kapseln är en stark struktur av polysackarid. Detta skyddar mikroorganismer från fagocytos och är därför en svår struktur att tränga igenom.
Det är därför kapselfläckar är baserade på kontrast. Färgämnena fläckar preparatets botten medan kapseln förblir färglös.
Därför är kapseln lätt att känna igen med dessa tekniker. Om mikroorganismen inte har en kapsel, kan den inte särskiljas med denna typ av färgning, eftersom allt kommer att färgas i samma färg..
Alla tekniker som används för att färga kapseln har samma skäl trots att de använder olika färgämnen och procedurer..
Anthonys fläck använder kristallviolett som en fläck. Detta kommer att fläcka bakteriekroppen och bakgrundslila.
Å andra sidan används 20% kopparsulfat. Detta fungerar som en tvättlösning, det vill säga det tar bort överskott av violett kristall från beredningen, vilket gör kapslarna klara men utan att förlora bakteriekroppens färg eller bakgrunden..
- Skimrande mjölk.
- Mikroskopglas.
- 1% violett kristall.
- 20% kopparsulfat.
- Optiskt mikroskop.
- Nedsänkningsolja.
Denna teknik består av:
Det är viktigt att inte använda värme för att fixa eller torka, eftersom detta skadar kapseln. Tvätta inte med vatten.
Iriserande mjölk är ett utmärkt odlingsmedium eftersom det ger de näringsämnen som behövs för mikroorganismen för att utveckla en framstående kapsel.
Å andra sidan kommer den iriserande mjölken att bilda en tjock och kompakt botten som kommer att färgas lila tillsammans med bakteriekroppen, men kapseln som omger mikroorganismen kommer att förbli färglös. Därför observeras en klar halo runt bakteriekroppen..
Det är en enkel teknik att utföra. Ingen fixning krävs.
På samma sätt bör det noteras att andra odlingsmedier kan användas, men mjölkmediet är att föredra eftersom det har fördelen att det ger mer framträdande kapslar..
Det är en lite mer mödosam teknik än negativ färgning, och dess visualisering kräver att man väntar på att preparatet torkar helt..
- Mikroskopglas.
- Odlingsmedium med mikroorganismen.
- Kinesiskt bläck eller nigrosin.
- Optiskt mikroskop.
- Fysiologisk saltlösning.
Placera en droppe fysiologisk saltlösning på täckglaset och lös upp en liten del av den mikrobiella kulturen. Det är viktigt att preparatet inte är för tjockt. Lägg sedan en droppe kinesiskt bläck eller nigrosin och blanda.
Ett täckglasplåt placeras sedan över beredningen utan att flyta över vätskan. Det observeras under mikroskopet genom att först fokusera på ett 10X-mål och sedan flytta till 40X.
Denna teknik kan också användas direkt på CSF-prover. Det vill säga istället för att placera en droppe mikrobiell odling placeras en droppe CSF.
Det är en enkel metod att utföra och samtidigt billig. Kräver inte fixering eller torkning av beredningen.
Det har nackdelen att det måste observeras under ett mikroskop innan beredningen torkar, för om detta händer kommer mikroorganismerna att samlas, vilket gör visualisering svår..
Å andra sidan kan falska positiva effekter uppstå om analytikern är oerfaren, eftersom leukocyter ofta förväxlas med jäst..
Observation av jästkapslar med kinesisk bläck- eller nigrosinteknik bör betraktas som en antagande diagnos av Cryptococcus neoformans tills det demonstreras med kulturen.
Det beror på att det finns andra jäst som kan orsaka hjärnhinneinflammation och inte bara Cryptococcus neoformans, såsom släktet Candida och Rhodotorula, liksom andra arter av Cryptococcus.
Om det finns kapslade mikroorganismer, kommer en mörk bakgrund att observeras, med transparenta kroppar som flyter i vätskan och markerar närvaron av kapseln..
Denna teknik kan också göras med nigrosin. Det är en kombination av tidigare förklarade tekniker. Denna teknik använder kristallviolett och indiskt bläck eller nigrosin.
Bakteriekroppen blir lila från kristallviolet eftersom den är negativt laddad, medan nigrosin färgar botten av utstrykningen. Om bakterien har en kapsel, kommer den att framstå som en transparent gloria runt mikroorganismen..
Kristallviolett kan ersättas med någon av dessa färger: safranin, basfuchsin eller metylenblått.
- Violett glas.
- Nigrosin eller indiskt bläck.
- Mikroskopglas.
- Mikroskop.
- Odla mikroorganismen i ett odlingsmedium.
- Placera en droppe av kulturen på änden av en bild och bredvid den, placera en droppe kristallindia-bläck eller nigrosin, blanda och sprida med slutet av en annan bild..
- Lufttorka och värm inte upp.
- Täck med en kristallviolett lösning i 1 minut, tvätta med destillerat vatten men mycket ömtåligt (mild ström), låt lufttorka.
- Observera under ett mikroskop med ett nedsänkningsmål. Sök mot slutet av spridningen.
En violett färgad bakteriekropp och en mörk bakgrund kommer att ses. Kapseln, om den är närvarande, ser färglös ut runt bakterierna.
Ingen har kommenterat den här artikeln än.